逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？

刘森泉

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* j7 J  D4 b. H( a3 H, L- L
逆转录病毒在293T细胞中包装，一般多少时间收病毒啊？已经两天了，293T细胞看起来状态已经不行了，可是我的备转染细胞还没长好啊！能不能放到第三天再收病毒转染啊，还是需要今天收病毒，冻存起来？冻存对病毒滴度影响很大吗？谢谢！

shylook

状态都会不好的
  X( d/ F/ B, E$ P$ t( o+ a* p+ s培养基黄了也不要去理会
  B8 Y2 i% ^( K9 }; Q/ h7 y4 S& |
一般转染之后48h收 有时也40h收3 O/ j4 T/ O# ^- U
很多protocol24h  48h分别收一次
  \* j: R! a$ Y+ r6 S1 r9 Y. X2 p: Q$ ~
个人觉得48h收足够
/ m6 J, o( J; S" i( x6 H6 r8 y7 q! R( @3 t* m; S; y
你可以冻起来（分装）也可以放4度几天再测滴度
0 l: O6 m7 S' S& s0 e+ w1 n本人是分装-80

lemma710

48h 72h收病毒，分开放，等测了滴度在决定要不要混起来。8 J' j0 }/ n0 y' T6 b
病毒你可以先收了，放在4度，一两天是没有问题的，以后放最好分装放在-80。; C( O# J2 }4 u; Q' D% m
-80是会降低一些病毒活性的，但长时间放4度降低的更多的~

刘森泉

谢谢各位哈。

yangpan521

我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好，就把病毒液扔了 。请求说法

tianlanghehb

72h收是没有问题的，保存一般都是放-80度。

shylook

yangpan521 发表于 2011-10-29 10:05
# L2 t( e* W' g) Y" E  K' z7 O我们这一师兄将病毒液放入了 -80度，被老师骂了一顿，老师说病毒液不能存放，应现收先用。如果细胞没备好， ...

+ S# |( c9 q8 d
只能说你老师比较死板
+ H$ Z8 [  ~/ f平时包的话 转染48h收! M( _( M/ f( Y! h# \
转染后加15ml DMEM
) ]: _$ d7 y& N- w" b+ A$ s8 ]收的时候能收14ml # _- W8 a) e& v# M+ z% `$ P
分装1ml/每管
) C4 h% S( ?1 U( w  @9 U" |) w-80保存
; L3 m3 L! _0 v: q7 E. f半年以上
1 g) \, I" K* a, m5 {3 z) D感染10cm dish 只用1ml病毒 ( {( g# y# R: \# [* e* Z
puro筛时 感染效率90%以上

guo6259

很负责的说是48h和72h各一次。但关键是保证293T在转染时是70%融合的。要不72小时就长的太密了。
3 T, Z$ ^5 \* n! G293T是关键！！8 O0 q& C9 z- m
至于收 的病毒-4度放一个星期也没什么问题。

王乾

病毒液一般转染完8-12小时换液，一般12小时就已经有病毒产生了，收病毒的时间一般是换完液36-48小时，也有人推荐36小时收一次，72小时再收一次混在一起用。另外病毒是可以冻存的，一般是液氮速冻，溶的时候好像速溶和慢溶都行，我测过冻前和冻后的滴度区别，一般冻融一次滴度会降低为原来的一半。病毒感染一般的细胞滴度一般不是问题，但感染ES滴度就不要太低，怎么也得10的6次方吧。

rexhz

你们的慢病毒都是用原液做吗？有做慢病毒浓缩的没有?