关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

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huangcong1988

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9 M% D& m: U* E' T3 C- |
  |  ^8 G0 G' O1 V文章中好像是收集慢病毒的过程吧，当然高速离心能在一定程度上提高慢病毒滴度，但是浓缩。。。

huangcong1988

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/ r/ C' n7 P1 c/ `( }( B' p& t, u8 J9 l3 u6 G
非常感谢！我是为了浓缩慢病毒

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子" g. z1 x* R( \! ^6 h: e) _
6 W: o4 _' q' u! s3 ?
你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?9 B+ c. @( w* }* a2 y
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？# T, K- w; B) B% a

7 k2 v0 s0 X1 t; j8 u' M7 o若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：0 o  S. M8 w- E

2 l# x2 _0 H* @/ C# o% C) F; @若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。
- L" G$ v7 u: U) H% G9 M  n, c! z; g# ~) g: m
补充内容 (2011-11-1 19:54):4 P9 b, u/ ]  s$ c; l0 S& l: X
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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. i5 j3 k# b6 t. P8 c- O* h. l* w8 a# k5 b9 D4 c
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子7 z1 m( s5 {6 N/ B0 i  ?
3 U. ]% d8 c) \3 d5 A# `* A# X& q
不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

john7812x

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6 H& }7 t! t5 B; }
+ I9 c- d" M* {3 c0 E5 F; NPEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
5 i3 ]0 D# I- k' S2 U' e但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
) u, C0 b5 A( P4 X" [9 i1 [' L* t" E# N/ K( g
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：& f( L% ?1 e8 i+ }! f! y

$ C5 r# W. K$ y+ P- @' q$ G5 W; t, ]) E; b% t- R6 d8 H
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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2 k1 m! ?+ z$ R, e6 N# R5 C( d/ ?; O4 x1 g, k  T, x
是，PEG也用于细胞融合