我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

0 C9 n, g0 q# ?/ R7 w' L$ r: B2 H+ F& J
这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？/ U* x3 I. J# ]& g: C. H( o
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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7 ?8 e1 M$ F0 T- x- Y% y- g
3 [$ W, J1 p; n' t/ L. L% s  f+ Y0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子6 n$ Z0 _; R8 r+ k: ^8 F. j

2 S$ |% z; a" {哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

回复 Tonypan 的帖子9 `  o9 p; w$ K' Z0 k$ k
( o" ?; \% ~( ~& `5 R% w$ N
如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

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! @* {3 k$ T  N
3 @+ b) l( M4 ?4 X' D9 Q/ k谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

回复 imgaga 的帖子5 ^8 j. {+ h) A1 _( W

+ l6 b8 K' n$ v) ^0 E- V不知道你们有没有用磁珠做分选的？
) P+ U4 @1 W# a* y; V贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。
  N( ]4 `) w# v4 N& b骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
. B+ f# ?1 g7 ^5 r9 u; U% s可以试试这个方法。
: w3 F, }5 l' `! }' F6 y2 g! L能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate, U* `( M- K3 J( n
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells
* ~  [, [' V5 t' Kcell stemcell 上的文献