我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？4 k. r) u, A- a5 W! u: y) Q2 G
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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# E/ S+ ^1 ~0 `" X  c2 }, C
/ [: v* y; @! ^; R* j7 S, f0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子
! n1 }, F# M' S! _9 I; `! F+ {3 S
1 _7 y( j) Q6 \' D0 u: s$ L哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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$ X6 N2 ]8 D0 t1 p, [- k  s
如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

回复 wangfw 的帖子7 S! j, K  r6 @' Y0 r+ G0 p
/ ?) o) s9 _1 `% ]/ I! M2 W
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

回复 imgaga 的帖子2 S  s( @1 V6 H3 Z3 W  H

, j# D' Q5 U9 ^# q5 v: u: N3 u不知道你们有没有用磁珠做分选的？* B! ]! ~* r5 }3 R9 \; s3 R* b8 o
贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。; F7 C" u' o4 x/ Z; l
骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁& H6 J, o9 X$ g
可以试试这个方法。
; p; j- }* t& Z- a& H) |: {能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate
4 t( [2 A) `$ w0 C+ \) |6 W4 tAutoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells" p; i0 M& B7 U4 B0 X
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