我的骨髓间充质干细胞怎么纯化不了呢？？有图片

imgaga

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这张图有两种细胞，一种是颜色浅的，应该是骨髓间充质干细胞吧？一种是图片里颜色深点的，小点的细胞，是什么细胞呀？这两种细胞贴壁都很牢，也吹打不下来，我消化了5分钟。这样的话，细胞该怎么纯化呀？/ ?" u# d% c4 z6 o% I
我养原代的时候，好像是5天首次换液，是不是时间长了，贴壁的细胞就不纯了？

Tonypan

可以做个流式，检测一下CD45和CD14表达。看看是不是单核巨噬细胞或者其他白细胞的污染。

wangfw

采用克隆杯法，在皿中找一处细胞生长较好，没有其他类型细胞地方，进行局部消化可达到纯化目的。

wangzhiqi86

采用Percoll或Ficoll淋巴分离液会好很多，混合液3000rmp离心30min后，吸取中间薄雾层，在加有α-MEM+10%FBS的培养瓶中培养，3-4天时首次换液，然后每2-3天更换一次培养基，一般两周左右能分离到比较纯的BMSC，我当时就是这么做的，CD44和CD29都能达到95%以上，几乎没有表达CD45、CD34

不苦的药

胰酶浓度是多少的，第几代啊

imgaga

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" `' C/ Q8 C) M, K/ X2 ~/ v9 _" R1 x# c: f* W2 B
0.25%胰酶，第一代细胞。

imgaga

回复 wangzhiqi86 的帖子1 S+ T+ k3 s% V
" H$ l/ B* L# l# x
哦，下次试试你的方法，呵呵。我的细胞长的怎么这么难看呀？呵呵。。怎么张牙舞爪的？为何不是典型的长梭形呢？

imgaga

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' t' S/ d% S3 N" ^7 I
4 y4 y2 c# e" A# b8 O8 y( C如果是其他细胞污染，该怎么去除呀？

imgaga

回复 wangfw 的帖子! `$ ]0 c3 C  \/ H* z
$ U2 t( Y0 ~# l4 d
谢谢您的点子，呵呵，我试试~~

Tonypan

回复 imgaga 的帖子2 O) l! W' P' k" Q+ c) Y

. B# C) w4 W+ F9 L8 R: ]7 V不知道你们有没有用磁珠做分选的？& l6 s' a" s6 x' o
贴壁后消化下来的细胞用CD14 microbeads或CD45 microbeads做个去除分选。( ^% e. D/ T4 V
骨髓里面单核巨噬细胞会贴壁
, @) w+ w% C7 z) x* u) j可以试试这个方法。
2 e; M7 U* ~- G( }  `1 f能找到这个方法的参考文献Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Ameliorate9 O3 J* ]) B; \, Z* n$ Z& n" k7 G
Autoimmune Enteropathy Independently of Regulatory T Cells7 ]3 `) W/ {5 o0 ^4 P
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