球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教) z* g& u- \1 D
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。
; Z# l+ h4 K* b) v3 f2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
" t9 k' K4 O7 z  G, r3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。1 _6 _8 y; \2 A( Y# ?2 ?/ s

. S* I1 L! L8 J4 r$ J谢谢！！！！！！

meister

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5 B: P2 w; t, c' |# e7 T
6 ^; T2 [! N  U$ C  j7 j; L& W悬浮细胞细胞当然也会死。 可以通过离心，更换培养基， 去除死细胞。

bin

回复 meister 的帖子; W5 _4 b' V" j/ z  S7 M: F6 ]

( M7 ^  R# ]. K/ Z0 p我想请教一下，有时候悬浮细胞培养的过程中会产生很多的细胞碎片，怎么去除这些细胞碎片呢？

doundo

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* ~3 M8 [, ]3 f2 P5 k
2 }6 B! S# R: i& G! m请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？
* }3 p( w1 T4 q  }+ U' d9 q0 V5 [. T* w- e$ R# _! _/ o
至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。
& I- w0 e& I. @8 b4 W# K5 a如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：1 n% ?% p2 B8 b0 }/ t
生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
, a% k) c# |. X0 M; H6 C4 N' z+ ?- f* J; V% a+ u7 \
但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

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) c* Y6 h9 O$ a' j5 _7 S4 Y) G% _, H" }; h  J$ R
感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

meister

回复 doundo 的帖子3 f3 X( d/ r6 @

! m% M+ l+ T0 C$ y) |: R3 d任何细胞都会死的， 肿瘤细胞，干细胞也会凋亡。只是程度不同而已。血清和好的培养条件，细胞因子等只是是细胞生长状态更好而已。 凋亡是不可避免的。培养条件好，细胞增生快， 细胞凋亡死亡少。
& a9 E  q" W8 F* v) @

meister

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8 R5 \. A6 g7 b7 O& C0 Y7 g
, Z9 W5 N* v$ a2 v: E细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

doundo

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# i% [8 A2 J  j+ M& G
7 l: D- U3 ~6 d# y9 N% h2 Z, P' W感谢shen-coco
/ |/ c* T  q5 a; o我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。; m2 ]  B" L" |; A
8 p! v' ?' U/ }
我想请问下，
3 N3 T0 i* X7 E7 L& `为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？
" ?% T, o& c0 G+ Z我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

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6 y: T3 j: R" x1 R  Z. m
; X% c& H' O6 N# |' N2 z; ?% u干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。