球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教7 p" v5 E/ Z$ F+ w( Y% J* G
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。: d+ W1 a& W8 a5 G7 N& f3 l. E
2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？
; I* P1 F8 Z- m0 @& h, k) {3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。
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: O' ~3 [0 ~8 h4 N) }谢谢！！！！！！

meister

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! V% B; T/ j- r1 C悬浮细胞细胞当然也会死。 可以通过离心，更换培养基， 去除死细胞。

bin

回复 meister 的帖子. u$ }$ S  T( |2 {

9 M  k/ f  R5 S6 |* b我想请教一下，有时候悬浮细胞培养的过程中会产生很多的细胞碎片，怎么去除这些细胞碎片呢？

doundo

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4 V, `5 F) ~. B: Z+ s6 u请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？
' i* S' A& c; }+ @0 J1 `, P3 _
6 G" m$ e1 s- Q7 x& M至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。: _8 g$ x1 O# L9 W
如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：; m; X, Q- [& G$ d) X/ l
生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
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但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

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3 i+ t$ D$ c; E7 E* S& a% ]) H! g$ d' L
感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

meister

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4 M7 Q8 Q) I8 y2 W0 R- w* j" p, g8 W1 G, |% D& |
任何细胞都会死的， 肿瘤细胞，干细胞也会凋亡。只是程度不同而已。血清和好的培养条件，细胞因子等只是是细胞生长状态更好而已。 凋亡是不可避免的。培养条件好，细胞增生快， 细胞凋亡死亡少。
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meister

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1 D& U1 V7 J' q  z. C4 D  J9 d; A" \) d# z
细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

doundo

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. ^2 a2 Q" I' S" b! |9 }+ ~0 }* s0 m4 q
感谢shen-coco 1 I8 z6 J4 c8 [* p* H" E
我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。* t& ~9 C" v" n
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我想请问下，# U0 G9 l5 h$ Y, @" f- k- X9 a$ x
为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？+ _0 ~# E+ B( F: ~( U
我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

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4 ~- F5 f) W- W3 u' g
干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。