球长出来了，几个小问题请教，如何分离球？

doundo

做的是原代细胞。球长出来了，除了球外，还有很多悬浮的小细胞，有几个问题求教; _6 m1 ~# F) {/ \& r( @
1、有什么方法可以只收集细胞球？单纯通过离心 会把细胞球和悬浮的小细胞都离至试管底部。
* @: X* X, l& t1 K+ ]2、细胞球传代与冻存时 是否将细胞球和悬浮的肿瘤细胞一起传代？+ S' r5 j$ D  ]2 g
3、取肿瘤组织做原代用无血清培养（加了bEGF，FGF,B27等 ），我养的肿瘤细胞是悬浮细胞，肿瘤组织中还有其他细胞成分，贴壁的细胞容易去除，悬浮的细胞呢是否会因为缺少血清而“饿死”？如果存在，如何去除这些杂细胞成分。
  x- g+ k% f2 Q) p4 K. g6 ~
$ |1 @3 A3 l- {7 u. E% O谢谢！！！！！！

meister

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% L' r: \7 p9 [$ w* Q$ A9 j: k
悬浮细胞细胞当然也会死。 可以通过离心，更换培养基， 去除死细胞。

bin

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; }- g; y3 Z( y" ]2 T$ j3 {7 [* D- ~& B$ m
我想请教一下，有时候悬浮细胞培养的过程中会产生很多的细胞碎片，怎么去除这些细胞碎片呢？

doundo

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) m! F6 W$ ?  `) b; N0 Y
% L2 [: u8 y) _4 Z请问除了细胞碎片外，那些悬浮的小细胞 基本可以确认是已经分化了的肿瘤细胞吗？——请问你做过鉴定吗？
8 y' q  @  E9 z" H5 M5 x
. e. m; {. N2 d/ m$ [/ w6 m  @至于您提到的细胞碎片的问题，我在dxy上看到相似的问题，他们是这么答复的：悬浮培养NSCs传代后都会出现死细胞和碎片，如果不是很多，那么可以不用理睬。
  D) T2 N; Y% X6 @$ `" @如果死细胞和碎片太多，那么我采取的去处方法是：
# q9 w" a) x) |- H2 M1 B* ~" d, ?) Y生长状态良好的悬浮培养NSCs，其密度会稍大于培养基，将neurospheres 和培养基吸出，置于15ml离心管中，3－5min后，球会沉到管底，而大部分死细胞和碎片不会。
) I' |; Y5 n' ~1 [! {0 [  @8 z9 p0 O- ~: t
但我个人意见 后边那个方法肯定会损失很多细胞球。

doundo

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6 U1 J- v; S" @/ j& X2 F
" T8 C- A; Q: T- E6 u感谢您的回复，请问是否是 除了干细胞（或干细胞与肿瘤细胞）外，其他的细胞都会死掉？是什么原因导致死亡（缺少血清？）？

meister

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! R5 z$ X  p6 w0 a* K8 ~) S: C! s! h% D, U
任何细胞都会死的， 肿瘤细胞，干细胞也会凋亡。只是程度不同而已。血清和好的培养条件，细胞因子等只是是细胞生长状态更好而已。 凋亡是不可避免的。培养条件好，细胞增生快， 细胞凋亡死亡少。* L) D' R% m6 d% E7 n

meister

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7 P: K! j7 |( R5 p+ g2 @9 v# K/ N8 L8 }
细胞碎片可以通过离心去除， 但不会很完全。

shen_coco

多培养几代，杂细胞就会越来越少的

doundo

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5 q# f4 ]% n# [8 }* a4 c1 X: d* X" d" @& c5 r( v
感谢shen-coco
2 {4 u( y, a) s: d) J我有两瓶传了代的细胞，感觉比上一瓶干净了很多。确实如你所言。
3 }. r7 h$ \$ A; M1 ^; y4 U) q0 f  R! J/ V
我想请问下，
* B3 U6 z) J* ]" t! F: J9 r4 Y为什么肿瘤组织其他非细胞不能再干细胞培基中持续生长？
8 M# n+ d2 _4 [1 f7 ^我手头有一株肿瘤细胞（悬浮细胞），我试图用干细胞培基培养干细胞，养了很多天，细胞增殖速度非常快。是否说明肿瘤细胞应该是可以在干细胞培基中持续生长？

shen_coco

回复 doundo 的帖子: U9 S7 j- {/ r
0 A5 j* [- W! z( R: b
干细胞培养基缺乏血清，一般的肿瘤细胞可能在干细胞培养基中难以生存，至于干细胞为什么可以在其中生存，我也没有特别的去研究，只是看到文献中用这种方法可以富集干细胞，我猜可能干细胞细胞周期较慢，需要的营养物质更少吧。