提过组蛋白的请进

xujie158

' W/ m0 N: t2 h6 T! a: H& U6 A4 B- l5 O, p. N9 R
因为第一次提组蛋白histone，有些问题需要跟大家请教一下。
! a" j) }' h4 E% k/ H我提完组蛋白，跑了一个SDS-Tris-glycine胶，然后用考马斯亮蓝染色，现在H3、H2B、H2A、H4位置都与其大小相符，唯独H1大小不符，正常约21-22（根据pubmed上公布氨基酸序列计算得到），但从图上看应该在30-32左右，而且是两条带，我又查阅了文献，Nature protocol上的一篇文章显示，其胶图与我的结果一致。
8 j" T# ?' q6 e' z/ @; [. b我的条带图2 f1 J$ l( w! r$ {4 b! Q

2011-11-25 08:54 上传

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. s. C2 P8 P& _+ A3 v) U0 ?
Nature中的条带图
" U; H8 d+ w8 f" ~+ E1 w% b0 s

2011-11-25 08:53 上传

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$ g0 q2 Q0 R0 o+ ^现在是请问谁能给我解释一下原因啊？
( n) Q! P6 \+ Q' P: E* M2 t我想知道比较确定的回答，如果是回答诸如是不是有修饰啊？是不是有几种不同的type啊？就麻烦大家发个“顶”顶一下就好了，当然如果能够给出具体的原因另当别论。

xujie158

" _- p0 ~/ y3 D, N0 E
4 Y1 ?7 n$ I1 `- ~" G2 I5 q
回复 mayansen1314 的帖子
: E" r  L/ v, m1 I+ S( L4 g' N7 {3 S2 @. p, i( D/ m. k; j
不好意思，我们是公司的，可能不能给你有效的帮助信息，因为我们所用到的western试剂都是进口试剂原装的，所以配方我们不需要管的。我感觉如果一般实验室实验的话，不会用到我们使用的试剂，因为价格都比较高，平均我们做一个板的western成本在200元以上，并不适用于高校实验室使用，如果你当真需要的话我可以把商品货号给你。
5 Q7 ~; U1 e+ B我们转膜的话用的是半干转，似乎也不符合你的要求。0 y! m$ n: y* {' ^7 m
你可以网上搜索一下，信息很多的。

mayansen1314

求阁下组蛋白提取及WB protocol，包括组蛋白裂解液配方，pvdf膜孔径，转膜电压电流及转膜时间，方便的话在给来点转膜液配方，不胜感激。

xujie158

谢谢大家讨论

xujie158

回复 eley 的帖子
" j7 Q& k! y$ o: q5 e+ O
3 ^* L: O4 K( o% A3 k已经解决，其实我知道是由于过度修饰造成的，因为只有这样的解释更加合理，但是却一直找不到合适的文献作为支撑，所以请教做过实验的人给出直接的原因，现在已经查到相关文献，附上一条
  k+ ~3 U5 X, @/ H3 g6 \0 {

2011-11-25 11:20 上传

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8 R  |$ v1 T+ l: `9 b来源blood

eley

给你个提示，有很大程度上，Histone是可以被酶降解的~~

274996064

组蛋白的大小和他的修饰是密切相关的，我建议你用抗体做一下  ，  你提的应该没有问题

shiyi

考虑用专门检测acetylation和methylation的抗体做western检测一下，或者把条带切下来做质谱分析。

xujie158

回复 shiyi 的帖子6 B) {' C' w* m$ q; B

6 X1 |* Q" B7 w+ G0 E& t我查过几篇文献了，结果都是在那个位置，而且都是两条带，现在就是不确定里面具体的原因是什么。

shiyi

Histone有乙酰化（acetylation）和甲基化（methylation）修饰，所以不是一条带而且比根据氨基酸序列计算出来的分子量大，你可以用H1抗体做western确认这两条带是不是H1。