提过组蛋白的请进

xujie158

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因为第一次提组蛋白histone，有些问题需要跟大家请教一下。
, O& ~4 R% u  ^- z; D  n0 \# A我提完组蛋白，跑了一个SDS-Tris-glycine胶，然后用考马斯亮蓝染色，现在H3、H2B、H2A、H4位置都与其大小相符，唯独H1大小不符，正常约21-22（根据pubmed上公布氨基酸序列计算得到），但从图上看应该在30-32左右，而且是两条带，我又查阅了文献，Nature protocol上的一篇文章显示，其胶图与我的结果一致。
; |. |/ H1 Z- B, K& B我的条带图
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2011-11-25 08:54 上传

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5 R* s0 B3 @# {( K  U* u7 _+ eNature中的条带图
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2011-11-25 08:53 上传

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7 _7 B( Q3 P' M& \# n2 I现在是请问谁能给我解释一下原因啊？
/ {4 V4 ]6 R8 L- z! d: _6 n我想知道比较确定的回答，如果是回答诸如是不是有修饰啊？是不是有几种不同的type啊？就麻烦大家发个“顶”顶一下就好了，当然如果能够给出具体的原因另当别论。

shiyi

Histone有乙酰化（acetylation）和甲基化（methylation）修饰，所以不是一条带而且比根据氨基酸序列计算出来的分子量大，你可以用H1抗体做western确认这两条带是不是H1。

xujie158

回复 shiyi 的帖子% B6 G/ ^$ C! o
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我查过几篇文献了，结果都是在那个位置，而且都是两条带，现在就是不确定里面具体的原因是什么。

shiyi

考虑用专门检测acetylation和methylation的抗体做western检测一下，或者把条带切下来做质谱分析。

274996064

组蛋白的大小和他的修饰是密切相关的，我建议你用抗体做一下  ，  你提的应该没有问题

eley

给你个提示，有很大程度上，Histone是可以被酶降解的~~

xujie158

回复 eley 的帖子
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已经解决，其实我知道是由于过度修饰造成的，因为只有这样的解释更加合理，但是却一直找不到合适的文献作为支撑，所以请教做过实验的人给出直接的原因，现在已经查到相关文献，附上一条
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2011-11-25 11:20 上传

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+ U! V+ r2 ~# v. \, W9 E, T1 `来源blood

xujie158

谢谢大家讨论

mayansen1314

求阁下组蛋白提取及WB protocol，包括组蛋白裂解液配方，pvdf膜孔径，转膜电压电流及转膜时间，方便的话在给来点转膜液配方，不胜感激。

xujie158

  S$ E! L! \3 P3 W8 Y  i7 q! g2 c  u2 [
回复 mayansen1314 的帖子2 u' e+ N- y5 ^5 J

0 C) O/ B) w. g! [' o1 u/ x不好意思，我们是公司的，可能不能给你有效的帮助信息，因为我们所用到的western试剂都是进口试剂原装的，所以配方我们不需要管的。我感觉如果一般实验室实验的话，不会用到我们使用的试剂，因为价格都比较高，平均我们做一个板的western成本在200元以上，并不适用于高校实验室使用，如果你当真需要的话我可以把商品货号给你。
& H8 Q3 S6 y- |$ o我们转膜的话用的是半干转，似乎也不符合你的要求。
2 e" s7 T5 R: F! M! H6 B你可以网上搜索一下，信息很多的。