提过组蛋白的请进

xujie158

% s; H  G6 `: p. d
9 b; H2 g* E2 r  ]7 l因为第一次提组蛋白histone，有些问题需要跟大家请教一下。1 A8 R3 P) {7 H  M% J6 x; y4 g. t
我提完组蛋白，跑了一个SDS-Tris-glycine胶，然后用考马斯亮蓝染色，现在H3、H2B、H2A、H4位置都与其大小相符，唯独H1大小不符，正常约21-22（根据pubmed上公布氨基酸序列计算得到），但从图上看应该在30-32左右，而且是两条带，我又查阅了文献，Nature protocol上的一篇文章显示，其胶图与我的结果一致。' g; I& |* [- i- n' I
我的条带图
2 ~/ Q9 N/ \/ P7 U$ H4 D& U! d

2011-11-25 08:54 上传

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' D1 u! v/ }$ CNature中的条带图* |5 \) r+ P3 ?& H8 |$ A  Z( \

2011-11-25 08:53 上传

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: P+ n  m" j7 b5 ]3 X现在是请问谁能给我解释一下原因啊？
' _* i- Y9 {! f我想知道比较确定的回答，如果是回答诸如是不是有修饰啊？是不是有几种不同的type啊？就麻烦大家发个“顶”顶一下就好了，当然如果能够给出具体的原因另当别论。

shiyi

Histone有乙酰化（acetylation）和甲基化（methylation）修饰，所以不是一条带而且比根据氨基酸序列计算出来的分子量大，你可以用H1抗体做western确认这两条带是不是H1。

xujie158

回复 shiyi 的帖子9 `' n; e$ x' G( a: ?; l- H, O
1 i* A7 K: W4 E% ^
我查过几篇文献了，结果都是在那个位置，而且都是两条带，现在就是不确定里面具体的原因是什么。

shiyi

考虑用专门检测acetylation和methylation的抗体做western检测一下，或者把条带切下来做质谱分析。

274996064

组蛋白的大小和他的修饰是密切相关的，我建议你用抗体做一下  ，  你提的应该没有问题

eley

给你个提示，有很大程度上，Histone是可以被酶降解的~~

xujie158

回复 eley 的帖子
# o4 E( [3 G+ W
- v" ?. Q2 K$ }# {) N已经解决，其实我知道是由于过度修饰造成的，因为只有这样的解释更加合理，但是却一直找不到合适的文献作为支撑，所以请教做过实验的人给出直接的原因，现在已经查到相关文献，附上一条7 t. c) G. T: c

2011-11-25 11:20 上传

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/ M  {, K; T: |
来源blood

xujie158

谢谢大家讨论

mayansen1314

求阁下组蛋白提取及WB protocol，包括组蛋白裂解液配方，pvdf膜孔径，转膜电压电流及转膜时间，方便的话在给来点转膜液配方，不胜感激。

xujie158

7 R/ X& q; ?1 ^  X$ u: t

( k. m& U" z4 X2 j: h& w& h回复 mayansen1314 的帖子
6 f1 M7 b- `) w6 ]0 b$ ]3 D0 l4 ]
不好意思，我们是公司的，可能不能给你有效的帮助信息，因为我们所用到的western试剂都是进口试剂原装的，所以配方我们不需要管的。我感觉如果一般实验室实验的话，不会用到我们使用的试剂，因为价格都比较高，平均我们做一个板的western成本在200元以上，并不适用于高校实验室使用，如果你当真需要的话我可以把商品货号给你。+ X6 V; W; p2 C8 s" Y
我们转膜的话用的是半干转，似乎也不符合你的要求。
1 O8 R0 |) G  `: ]  Z7 g; J" _你可以网上搜索一下，信息很多的。