请教MII期卵子染色体扩展

yahyo

有哪位大侠做过MII期卵子的染色体扩展吗？我用的是1%的柠檬酸钠通透，接着置于玻片上，逐滴加上10微升的固定液（甲醇：乙酸=3:1），结果卵子经常找不到，不能达到扩展一个卵子染色体的目的。而且几个卵子一起固定时，有些卵子染色体没散开，有些却冲的很散，这是为什么？希望各位能够帮帮我！我的最终目的是能够将一个卵子的染色体有效地扩展在玻片上，不要找不到卵子，谢谢！

zpzp0312

另外再说一下" K% m9 e2 [: J, X' V
MII染色体展开确实较难做4 V+ H$ g1 D* m" o
最好还是一个一个的做

zpzp0312

回复 yahyo 的帖子5 ^) z# q, X0 j3 S/ S, x
  M+ O3 B" u6 a: v; G2 ?, L
在镜下仔细盯着1 N" ]. h5 w$ v; @9 k, [; Z5 x
否则的确很难找

zpzp0312

yahyo 发表于 2011-12-5 17:17
% G5 Y1 }+ x( A论坛里面有做PGD（胚胎移植前基因诊断）的吗？个人觉得临床上的卵裂球原位杂交技术可以参考一下！

" b) }$ T) D4 S9 b; U
PGD取出的是核不是游离的染色体
1 q- J; B( `9 S8 `) G& P, }应该比MII染色体展开要简单

hcluo

回复 xiaomingxu 的帖子2 I& X2 [: F4 C0 G4 U4 B* ^

" D- K6 W4 M# E谢谢，准备尝试

xiaomingxu

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1 w1 a8 {+ ~6 V& E$ x! f& g3 E. A# Z2 i6 d. q' G
确实遇到这种情况，你可以用玻璃笔在玻片下面画一个很小的圈，然后把卵母细胞转移到其中，体视显微镜下操作。

xiaomingxu

回复 hcluo 的帖子
: |9 C! K" w: {6 F" ~2 C7 C* P& [) d% ~& p
低渗液：1% （W/V）醋酸钠+0.6%BSA;时间5-10 min；
0 E$ E. P+ I8 E5 K固定液：10 ml 五蒸水中添加10ul的HCL 和10 ul的TW-20;时间要自己把握哦；
/ W0 u8 Z8 [! g4 b; \. uAT是酸性Tyrode，去透明带用的，PH2.5，1min左右即可。
& a& P. m4 l8 E3 V! a你们可以尝试一下，然后共同改进哦。

yahyo

回复 xiaomingxu 的帖子! Y5 T7 ?; i- Z/ N  Q$ ~
, H; H. C+ U3 Q5 H1 B( v4 p/ J
我说的成功率是看到核的成功率（即10次固定卵子染色体，每次一个卵，有几次可以看到染色体）。因为只有1个卵子，固定过程中容易被冲走而丢失，很容易找不到核，你是怎么标记固定卵子的大概位置呢？能讲下细节吗？谢谢！

hcluo

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0 V/ _6 r4 m" W& O! A1 X" O. x8 m- p" O8 J& o* J
请问你用的低渗浓度是多少的啊？时间多少？固定液的浓度是怎么样的啊？具体需要多长时间啊？你是载玻片上固定吗？需要滴片吗？你用的AT是透明质酸酶吗，浓度多大啊，处理到什么程度？

hcluo

6 f9 l7 ]: ^6 I; O/ L5 z+ d; ]1 }; N& k$ Y3 g
我也最近在做成熟卵母细胞的染色体核型，我得到和楼主差不多的结果，发现加入甲醇和冰乙酸固定液以后，确实对细胞的影响很大很剧烈。我用的低渗液是68nm的KCL, 用了三步固定液，第一步是固定液甲醇：冰乙酸：水=5:1:2，第二步固定液，甲醇：冰乙酸=3:1，第三步固定液是甲醇：冰乙酸：水=3:3:1，最后在载玻片上看到一些没有破裂的卵母细胞，还有很多不见了。所以也来求各位指导。你们也用超排来做成熟卵母细胞染色体分析吗？另外，烤片有必要吗？低渗液浓度是不是太低了啊？