求助！免疫组化测肿瘤组织CD133，阳性率太高怎么回事。

胖兜宝贝

我用SANTA CRZU公司的CD133单克隆抗体测的，CD133阳性率20%左右，在阳性的标本里面，无一例外都是高表达强度。
) @: R; I0 Y; ^% L4 @5 x按照文献，肿瘤干细胞阳性率应该在1%以下，可是我做出来的阳性病例全是下图这样的，大量表达CD133.
7 m' T* c7 m: t0 ]6 a1 l! i: I$ }! ^. B) ~) S; f
请教大家，会是什么原因造成的。

pharmD

SANTA CRZU公司的质量到底行不行啊？

279042256

我感觉有几种可能：, ?  e4 ^9 C" I
1.一抗浓度过高/ M  r! i5 P3 ~
2.修复过度，可以试试温和修复如蛋白酶k修复试试, j; M8 K( o6 G
3.显示时间过长或染色液难度过高' a1 P. `. H' U( L! Y% w& V8 D
有问题可以随时问售后或者干脆换个抗体试试

胖兜宝贝

ljs 发表于 2011-12-9 14:53
0 J  I. @$ E  T4 ~6 b抗体浓度过高造成的，有这种可能！！
" z' m3 x% o. z* u实验条件摸索的建议如下
7 n9 b7 n; q9 d6 I% ?8 `# E1.一抗反应条件4度过夜，设置好不同的浓度梯 ...

  K* ^" Q1 {6 a) W$ m
谢谢，我按照你的建议再试试看

ljs

抗体浓度过高造成的，有这种可能！！- |6 I1 P, p! N) V  x  X5 I
实验条件摸索的建议如下5 K: ^$ K% ^0 v( S, f" ?
1.一抗反应条件4度过夜，设置好不同的浓度梯度
- F1 P) L2 {# a' v9 k% |3 e" O2.可以试试不用高压修复，或者减少高压修复时间，看看效果。. L$ v3 O% K6 `' h
3.最后的显色时间、显色液的浓度应该降低。6 O4 m* @5 |' n' l- p3 C
根据你提供的信息，这个抗体的阳性部位在细胞膜，针对抗体的建议如下：) s' O% l& m2 _9 r+ n
1.更换抗体，从其他的单位找到这个抗体和阳性病理切片，即阳性片，国内很好买到，做着看看，应不成问题，没多少钱。经费不够不是理由，大不了自己掏钱。
: g) P0 W3 ]4 \( O3 K( _+ g" P2.联系santa售后服务，要他们来解答。

胖兜宝贝

ljs 发表于 2011-12-9 10:07
" S3 H2 ^* s0 n1.把阴性对照的图片传上来，先看阴性对照。
- Q( a1 l& g8 z8 I1 j4 P2.你用的修复方式是什么？不同的修复方式及修复方法对阳性结果 ...

& ~# ]) S- ~1 v# {- H
我在论坛里看到有人说这种情况可能是抗体浓度过高造成的，请问有这种可能吗？

胖兜宝贝

gandanxiaoyang 发表于 2011-12-9 09:24
7 F+ O; p; c& d( F+ h; H以前用的是美天旎公司的CD133抗体。4 B5 M: ^2 x9 \; k4 D$ `
需要提醒的是，美天旎公司抗体说明书上说，最好是用冰冻组织的切片做。 ...

7 ?0 u4 G3 _9 U是的，基本上都是核染色，按道理是应该胞膜阳性的。但是还有不少阴性的病例。为什么有少数标本表达强度那么高，但是还有很多病例完全没表达呢？

胖兜宝贝

$ }- t3 l0 \" ]  j* y4 T* i
这是阴性表达的。3 T) i# t0 ~( x" ?2 y8 `
修复方式是高压修复。
6 T( ~, [% H* m染色是用了Elivision plus试剂盒，一抗在37度下孵育1小时，二抗在37度孵育20分钟。

胖兜宝贝

回复 cneagle66 的帖子
2 j2 T+ R7 c, G. I& l# f
1 x1 F( v7 }% W, C% X实验经费不够了，这个抗体花了2800买的。                                             

ljs

1.把阴性对照的图片传上来，先看阴性对照。9 k1 _: L3 ^; J- z8 M/ F
2.你用的修复方式是什么？不同的修复方式及修复方法对阳性结果有很大的影响2 A& D# r- i- Y1 [7 L( X
3.染色时间是多久？3 X/ \# D7 |# L& F: |- m
4.一抗、二抗的孵育条件是什么、种类属别别搞错。# S* V3 I8 Q, G) k3 J; ~
总之，综合以上的问题，把各个条件优化到最佳。你的实验仅仅是刚开始，没有优化，出现假阳性有可能。