紧急请教一个关于转染细胞蛋白表达所需时间的问题！！谢谢！

webber43

请教各位大侠，在pMX载体上连接目的基因，用lipo2000转染293T细胞，什么时候能够在细胞内表达该蛋白啊？？我做的GFP阳性不到一天就有比较强的荧光了。问了师兄师姐，他们说这个跟蛋白大小有关，我的蛋白大小50KD左右，不知道1天的时间会不会有表达啊？？
; @6 b1 {7 ~1 F+ D; b要外转了去做IF的，要是没有表达，我就悲剧了哦！！
5 Q2 X( i3 l+ @9 i% ]; t谢谢各位啊！！

Yedan

& X- ^7 r+ Z7 b4 n
* A, f& P* V9 R6 K
LZ我先说句题外话啊，为什么要用pMX做过表达呢?你把pMX转293还不如pcDNA之类的载体表达量来的高。还有，我不知道是不是我理解错误了，你想说的是用pMX包的retrovirus然后感染目的细胞，GFP 1天就亮了。那你对应的蛋白也应该表达了，我做的时候检测postinfection 48h 目的蛋白就已经overexpression了

zxcv12345

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! ?0 H5 c7 C3 v# U/ \! w
4 T0 v$ ]- c4 ~/ v- x- P( b9 q很正常，转细胞的话，6小时就可表达蛋白

gandanxiaoyang

一般说来，24-48h后，蛋白表达就比较强了。24h后做免疫细胞荧光，应该没问题的！

webber43

回复 Yedan 的帖子8 b3 t3 X; `( n: T' f6 X/ x& q

" M, m5 Y0 o3 j$ W+ S7 w呵呵，因为实验室有现成的连有那个基因的载体，我就嫌麻烦，没有换其他载体直接转了。好像转染以后，蛋白小的表达快些，大的蛋白表达慢些吧，我也不知道为什么，希望有牛人指导啊！！

webber43

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: ]6 I5 y" D( b" B3 D4 l. j5 X* r9 L& U* G8 |( U; H- C9 N
恩，非常感谢！那这样我就放心了，呵呵

webber43

回复 gandanxiaoyang 的帖子7 @4 Q9 A/ m, R' c2 N3 t

) T$ c' i0 l' f$ q/ z也是，protocol上说的是转染48小时以后收细胞，估计48小时以后蛋白的增加就不显著了吧？

eley

这个1天就可以了，时间长了，蛋白量会积累，看你的目的了。
3 u1 G- x* e- e* x, Z如果是做IF我认为1天就足够了，如果要做WB可能要的蛋白量比较多，不过这样的话，2天也是足够足够。我以前的蛋白300K，2天就表的非常好了~~~

webber43

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' g( t" _, d3 o, S" K% o
  I) Q0 m* P+ J  R7 l恩，非常感谢，期待阳性结果的出现呵呵