几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题

sothiskk

初次培养msc，问题比较山寨还请大家见谅。+ j5 j2 F5 U* H& F3 b
个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔，离心后培养基重悬。几个小问题：9 R, Q# f. {8 u, f3 {; j4 I
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗，大家都过滤吗？因为我听某前辈的没有过滤，结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围（大约72h）。9 q4 P! \: [1 O" `0 L* Y
2、大概和没有过滤有关，首次换液之前培养液中杂质比较多，比较混，按照以前养其他细胞的经验应该是污染了，于是就扔了。可连续两次都是这样，就硬着头皮给换了液，又过了几天生长情况还可以，也没有污染的迹象，这正常吗，各位首次换液之前的培养液是清亮的吗？' T( j& b9 C6 m( P! C$ Y
3、72h第二次换液之后，还是有不少贴壁的圆形细胞，形态看起来应该是红细胞，看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞，请问那是多长时间以后的事儿了？

漫游天龙八部

我是通过兔抽取骨髓培养的，抽取时在注射器内加入肝素钠，原代培养是间充质干细胞也是从细胞团周围开始生长，培养液也浑浊，但传代后细胞形态典型，而且生长很快。

漂泊的风

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& P  U6 N& W/ P, J( z
9 H) A2 Z8 ~6 p, o* z! E养骨髓间充质干细胞在前两次换液是比较浑浊，但是一般情况下不是污染，到第三次换液就清澈了；至于大的组织块我们都没有去除，细胞长得也挺好的；有杂细胞也是很正常的，毕竟在骨髓里间充质干细胞站的份额是很少的，经过传代可以使干细胞进行纯化，一般到第二代就可以达到纯化的间充质干细胞了。

sothiskk

回复 luoziwei 的帖子  \/ i8 L  k- R/ b

$ r6 j! f6 y; c% j4 o! [- l8 g$ w同意。

luoziwei

回复 sothiskk 的帖子$ _0 W3 L+ o4 ?5 G8 g% b! d0 M$ H
8 u7 T8 q; c, t5 i) m6 F
我没过滤，24h就换液，能贴壁的才是好细胞，rapid-selfrenew细胞，呵呵。

sothiskk

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3 L, k$ `/ V4 f; x3 [$ ~; G$ P
; }2 t; C. {/ ^$ K! Z2 ]1 S7 ?谢谢，现在已经正常了.

细胞海洋

回复 sothiskk 的帖子# c8 b1 ?7 k& X
& q& h+ X+ H: M+ {: \" q
呵呵 那我误会了 抱歉 你换一个浏览器登陆论坛吧 有些浏览器不是很支持 火狐？

sothiskk

回复 spchsq 的帖子
" A9 N$ h+ i; M% I
- {: T& l5 y. |6 Q- ?多谢指教...

sothiskk

回复 细胞海洋 的帖子% \1 X, L! J5 o$ S! Y/ h, y' s
" D/ @4 L$ \: [
谢谢，这个...您把我想的也太山寨了，我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...

spchsq

1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒，是造血细胞生长中心，干细胞应该在骨髓小粒中，是不能过滤的，如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了，很好区分的。" U5 B( h' Y% T* Q4 P6 J+ O
2.做动物实验，因为己处死动物，所以防止凝固应该缩短离体时间，凝固也是发生在这段时间，如果采用培养液冲洗骨髓腔，此时骨髓已稀释不会凝固了，不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。