几个关于全骨髓法培养MSC的细节问题

sothiskk

初次培养msc，问题比较山寨还请大家见谅。* X$ N& S" V& `8 j* L/ ]
个人用2%FBS的PBS冲洗髓腔，离心后培养基重悬。几个小问题：9 `6 b/ ~( p. ]: a4 S1 \- V
1、冲洗髓腔时过滤掉大的团块是必要的吗，大家都过滤吗？因为我听某前辈的没有过滤，结果类似MSC形态的细胞还真都出现在贴壁的团块周围（大约72h）。
$ r( f) _! p8 r" N5 q& U2、大概和没有过滤有关，首次换液之前培养液中杂质比较多，比较混，按照以前养其他细胞的经验应该是污染了，于是就扔了。可连续两次都是这样，就硬着头皮给换了液，又过了几天生长情况还可以，也没有污染的迹象，这正常吗，各位首次换液之前的培养液是清亮的吗？
1 i7 L8 v2 R4 C6 q1 x; u! m3、72h第二次换液之后，还是有不少贴壁的圆形细胞，形态看起来应该是红细胞，看到别人很多图片上完全看不到贴壁的圆形细胞，请问那是多长时间以后的事儿了？

signext

问题不山寨，很实在0 B) ^; |1 u5 T
1.过滤 大的组织块还是要去除的- c6 p4 s; }% G: v* t( {
2 首换液前杂细胞多 死细胞也多 是比较浑 没事的 - V6 D, ]+ y9 n8 S% U. A
3 好的话传代后吧

zarecol

从你的步骤来看，你养的MSC是动物源的吧？用的是全骨髓培养法吧？
8 r9 d8 r/ B7 [' ^/ o6 i首先，全骨髓原代培养的话杂细胞是比较多的，而且加上大量的血细胞，接种后发现培养液不澄清是正常的，但也不会像染菌那样，因为毕竟PH不会有太大的变化，如果你所用的培养液中加入了指示剂的话，你会发现培养液浑浊，但是颜色基本没变化。而且井下观察培养液依然澄清，只是有大量的悬浮细胞，首次换液后就会变回澄清了。
- [/ P$ z! q  b8 D  D其次，你所描述的大的团块是不是血栓呢？如果是的话，你可以考虑把你所用的PBS和培养液做抗凝处理，不过，即使不处理影响不是很大。细胞依然可以生长。但过多的血细胞会消耗培养基中的营养成分，所以，要及时换液。* N% V; m- s: \# \
再次，贴壁的圆形细胞是正常的，是骨髓中的杂细胞，随着培养的换液和传代会慢慢消除不必担心。
2 G9 D' ?: N  U个人观点，仅供参考。希望对你有所帮助！

yyyan126

全骨髓培养法是这样的，第二天会变得比较黄比较浑浊的，但不是污染，是正常的，通过换液就可以了。

sothiskk

感谢各位的热心帮助，原来大家都是早上出来活动...

sothiskk

回复zarecol : 谢谢，是大鼠。大团块有可能是血栓，但是在冲骨髓之前就已经就形成了的，可能和我操作不太熟练，离体时间比较长有关。不知道您说的抗凝处理指什么，但我觉得这种情况加肝素应该没什么用吧。

细胞海洋

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5 J! r4 i8 t: Q8 k+ r( o1 b. T0 g- f4 k" L7 A0 {4 i" B: y
回复谁的帖子，就点击他回帖中的回复按钮，像我这样，你这样回复他看不到提醒的

zarecol

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' v4 {6 V; \; d) G% D' c. E
) M9 M( Z3 S! e! f如果已经形成的话加肝素就没用了，不过如果你取完骨髓有操作时间比较长的话，可以考虑加一点进你的PBS和培养液中，对细胞培养没什么影响的。

spchsq

1.觉得骨髓中白色团块是骨髓小粒，是造血细胞生长中心，干细胞应该在骨髓小粒中，是不能过滤的，如果是凝块应为红色且有纤维聚集应该是血液凝固了，很好区分的。
( J9 v1 Y0 Z7 `) ?% m: `2.做动物实验，因为己处死动物，所以防止凝固应该缩短离体时间，凝固也是发生在这段时间，如果采用培养液冲洗骨髓腔，此时骨髓已稀释不会凝固了，不需要再加抗凝剂了。如从人身上取骨髓则在采集骨髓时加入抗凝剂。

sothiskk

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) ^9 M2 G( R1 K2 d8 A: p谢谢，这个...您把我想的也太山寨了，我是当时点了几次都让我重新登录才无奈为之...