求油红O原液配制详细方法

冰枫de梦

    我是将油红O溶于异丙醇中，但有时溶解不充分有少许沉淀，求解。

zerollx

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# D1 P5 T' h" C/ N3 C' {; a( r
" b) \' v+ a* g溶解不了是正常的，稍微颠倒混匀个5~10min，再沉淀一会，直接取上清过滤待用就可以了

tjbone

1.染色液的配制:7 L/ H- \, c7 O+ z9 O, m
材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸" ~( `8 R( F" d/ ~+ F$ P5 }( E
称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。
4 x- M7 J* {% ^  S, q8 C- }/ n! P2.10%中性甲醛的配制
) d! K( R, H& y2 ?% _9 o& y材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶
, W4 q1 Y6 ~5 L+ Z# k称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。
. ^6 n' i$ U) ^3 w. G: W3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
, u. D8 I$ Q  N9 c$ |4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。; ^) F3 S; i* _, R
5.染色步骤：
$ O( Q% ]( O1 ]6 L* g3 X0 [* i$ _5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
3 [  B* z' ?7 |' M5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。6 m# P- q4 [  y. V  Z8 M6 o
5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。: \4 v# T+ z6 f
5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。
3 B( R: s3 E  H5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
. ~- I7 y1 Q% ^" r2 u* |  P5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
/ k1 }0 P3 ?9 B, G9 o! w5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。: }; I% E% o% i, G1 G& q! H: y
5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。# w$ ]$ J7 q! R) d
5.9 显微镜观察。

mansnoopy

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+ N8 k0 u2 x6 h: {6 i' p6 s% K9 ]' N
你溶完后需要过滤的，千万不能直接用！

冰枫de梦

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% O8 e; o! u. A, u" ?2 [) m) Y2 d& }' {: ~( l+ E. N* l4 r5 I
谢谢  呵呵

hhxxattxs123

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0 }$ S! f* \% d" S$ ^
. Y. X1 T- X8 ]% v过滤的时候，用什么标准的滤器啊？

天枰2012

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* z3 i, B, T( k# f. v
用滤纸