胶原酶、accutase还是dispase？

sizhengliu

请教大家，在做ips传代消化时，选用哪种消化酶（胶原酶4、accutase还是dispase）性价比好？
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3 P) c" S$ B1 f3 v6 z; i- k- i: }补充内容 (2012-2-6 21:26):/ x& S9 G& C2 B0 J( c, ?
你们一般用哪种呢？

hjd8886

我们实验室用的是EDTA啊，37°消化5分钟就好了。

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子7 b" ?# l9 g6 l0 g3 [: _3 `
- |$ P) L1 d- r' n6 o5 u5 {! O4 E
用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。 配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。

sizhengliu

回复 第一心音 的帖子+ K' \+ p6 R- u! i' H/ W# Y
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是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

sizhengliu

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; y# @; F8 l& `2 `9 J! a7 I
5 X" s5 I, U! g/ {/ K5 K3 b; @, p谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

bubble_w

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" x% C; a0 k& Q) G8 \. F小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

第一心音

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

shuishan

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液
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sizhengliu

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; j* t  _1 Z. Q1 ?0 q% F& L2 U4 Vthank you vary much!

lchanlon

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using  1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.
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补充内容 (2012-9-22 10:12):
$ ~/ \5 W9 }' ~" J1 x( @% E8 Q. ^* sIn our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory