胶原酶、accutase还是dispase？

sizhengliu

请教大家，在做ips传代消化时，选用哪种消化酶（胶原酶4、accutase还是dispase）性价比好？) ^# S5 e* s8 A3 L( P0 F
& V: D" R" h( D
补充内容 (2012-2-6 21:26):
$ q, l3 _, J- N2 d* f& H你们一般用哪种呢？

hjd8886

我们实验室用的是EDTA啊，37°消化5分钟就好了。

bubble_w

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0 M/ X% u( Q. X2 f
7 C' U7 G; C$ g! J  T用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。 配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。

sizhengliu

回复 第一心音 的帖子: m7 z+ O6 o5 r9 f# W, h' l
$ j- |, S7 x! S3 e
是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

sizhengliu

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  t0 ^/ o% w8 f7 U' g
1 _8 n) [! U1 F: Z谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子% `7 f4 R' H: m* c3 u
; H8 _, X  j9 d1 I+ G" @1 ]! j  Q1 _
小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

第一心音

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

shuishan

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液
# O; e4 n: s2 t4 J: j4 U) s

sizhengliu

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+ F: c( \% K0 ], P8 r" `
9 k3 J% M; g4 l; lthank you vary much!

lchanlon

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using  1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.7 s1 r- O7 b. p5 G0 ^* o

& n6 Q# S9 o. G补充内容 (2012-9-22 10:12):
- o/ b) b' y  \) _- PIn our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory