胶原酶、accutase还是dispase？

sizhengliu

请教大家，在做ips传代消化时，选用哪种消化酶（胶原酶4、accutase还是dispase）性价比好？+ J8 w4 c7 N/ J0 {" [" u9 y

. z8 ?1 |( X% Z4 u7 @补充内容 (2012-2-6 21:26):
3 h4 r/ r- G( b2 ~3 F  r你们一般用哪种呢？

hjd8886

我们实验室用的是EDTA啊，37°消化5分钟就好了。

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子: L2 ]/ ]' m, l/ }; l1 h" U# \
& L( N3 v( _/ R7 K8 Y
用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。 配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。

sizhengliu

回复 第一心音 的帖子! i& z7 k6 J3 L4 R8 x" M9 }

- a. }- s3 q$ B/ _# ^* C是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

sizhengliu

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' Y, n; U, L: ^& f) m& s' w
谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子5 D2 T+ I/ b% Z) k$ L$ E! Z

/ G% [  c$ n3 A4 Q$ h小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

第一心音

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

shuishan

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液3 D: J: m& H9 h; z) x

sizhengliu

回复 lchanlon 的帖子- _+ ]& r2 A( L. H5 [  x- D! A

7 ?9 C! ~% n5 @+ ?0 Rthank you vary much!

lchanlon

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using  1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.
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# `7 g' v- L- T1 j' R4 u9 A7 k补充内容 (2012-9-22 10:12):
6 W+ h% l- i( Q8 K7 m' U% f# K7 }( rIn our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory