求教！关于小鼠iPS培养基配方的问题！

ligangtiancai

RT，小弟在培养miPS中发现视野中细胞碎片较多，且在传代后3天内就有大量的分化，不知道是配方的问题还是MEF的问题。小弟培养基配方是：高糖DMEM210ml（Hyclone）+FBS 25ml（Hyclone）+NEAA 2.5ml +L-Glu 2.5ml+2-ME 0.25ml+LIF 1000U/ml MEF是自己分的昆明鼠。: s; I- l  G% g3 ^9 B& A
请教高人：
6 q1 F$ N" k2 w$ n; Y9 R0 {2 o: b1.有成功经验的培养基配方
* g  p7 L* x( N) Y2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）
. j  E5 f, ?" i' m6 l8 L( q. }3.传代周期？
! h/ R, k; e) D4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）" {. a  b0 m+ q7 r8 d) m# e9 y
5.求几张不错的miPS的图片参考一下。, Z* [: T* ]$ E$ }# V0 W8 ~9 s
        感激不尽，先行谢过！

ligangtiancai

求教高人啊！

mohanmud

5 |* E" k9 {" D3 P1.有成功经验的培养基配方
1 X- `  p8 q4 \  n: e; k$ J4 SKnock-out DMEM+20% ES-FBS+1%NEAA+1% L-Glu+0.1mM 2-ME+LIF 1000U/ml- B+ Y8 h. d& p% T

7 C% o6 _: C' v4 ^7 K7 d2.胰酶的选择（是否+EDTA？牌子？）
: g7 k" y. G& U0.05% trypsin+EDTA
8 u  s, s8 C; x1 T% }3.传代周期？  
7 N% D; P0 [* B1 G# VAround  48 hours" i2 m  M' f$ c6 g
4.MEF的选择？（KM MEF是否可以）
& O5 s) ^8 j2 U) G# u0 _MEF from CF1 mouse is most used，no experience using KM MEF
2 u' O- l; g/ m2 |8 m! C/ j
/ W& w5 H) S" E3 z* Q6 Q5.求几张不错的miPS的图片参考一下。
' b" L, w. z1 ~9 g- U
& {" t. O+ J5 ~& VYou can find plenty in literature.
+ h% X. W6 S8 w' `$ V$ B" S
7 f/ T  k% [1 Q

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子6 q. M* r" v. K8 |6 h* Y

, x* C8 [% \6 M% p' i谢谢，不过文献上miPSC不是多数用的是C57的MEF么？CF-1的是不是多用于人？再就是这里的ES qualified FBS和我所用的Hyclone FBS相比优势在哪、、因为我刚买了500ml的血清，不知是不是就不能用了 必须用ES qualified的，望不吝赐教，谢谢！

mohanmud

回复 ligangtiancai 的帖子. _* m6 B4 I) q$ I9 k. f. Q
: i8 Z# A- {; Q( q+ j0 G$ k$ v
I did not compare the difference between C57 and CF-1 MEF,  but CF-1 MEF works fine for me in both human and murine ES/iPS cells.
( }3 f0 v& J/ L0 U9 W: w# B& f% E6 C. O# X* v" w: I; B6 g
Regarding to FBS
( ~% X0 b: w1 B; i2 u8 U8 ]Check this:
$ M8 W; P. m, W7 C/ Q3 B& `: qhttp://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Embryonic-Stem-Cells/ESC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/es-cell-qualified-fbs.html

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子  N4 B4 [- [, G

7 A! M  F4 Q8 {; E! p( I. i好的  谢谢！再就是请问一下LIF能否直接加到配好的培养基中，我现在是每次换液的时候现加的，老师说是长时间加在培养基中LIF效价会降低，不知你是否有这方面经验，谢谢！

抹了个茶

我的lif都是加在配好的培养液中的
- w3 V4 r8 K2 v( Z: B9 a( |

抹了个茶

对了 我现在是用2i体系的

ligangtiancai

LIF直接加到培养基中？不用每次换液都再加么？还有  不好意思请问2i体系是什么。。谢谢！

抹了个茶

现在小鼠的ips为了维持self-renewal和多能性有两种培养体系 一种是bmp加lif的  或者说是血清加lif 另外的是2i加lif这种 2i是指erk通路和GSK通路抑制剂