请教一个问题 为什么基因打靶要用雄性ES细胞系

懵懂干细胞

麻烦那位高手能解释一下吗？
5 y/ F4 z  m/ x+ E* e9 v4 O: d9 o4 [; @: c) h3 P1 P/ E. d; i1 y
谢谢了

懵懂干细胞

我想到的只有两点，一个是可以对Y染色体进行敲除；另一个是可以避免由失活的X染色体甲基化状态改变等带来的负面影响。

sarah19860420

选择雄性的ES细胞系，只需要敲除一次就可以得到纯的KNOCK OUT 的细胞。而雌性的是有2个X染色体，即使敲除一个，也还是杂合体，我是这样认为的

xiaojunhu1985

这种回答应该都有问题。其根本原因一、由于雄性ES细胞，遗传特性稳定，二、外源基因一旦整合到基因组，进入生殖系，公鼠交配可以重复利用，在下一代中更容易得到敲除小鼠，。

懵懂干细胞

回复 sarah19860420 的帖子/ K$ V) z& V* }

! W" ?8 \/ S! {( H0 H8 z当敲除的是X染色体上的基因才符合这种情况，但一般都不是敲除X染色体上的基因的，敲X染色体上的话还要进一步讨论

懵懂干细胞

回复 xiaojunhu1985 的帖子
0 O, _' x+ h# X% [6 Z8 o$ V/ e# f. F7 W. X1 F. P% d2 F3 R! j
雄性ES细胞为什么遗传特性稳定啊？ 雌雄不可以重复利用？

lifeida

用雄性的主要是后代好交配，获得纯合个体，如小鼠上敲除了公鼠的a-半乳糖苷酶，通过杂交、回交就可以较快的获得纯合体。

sarah19860420

回复 懵懂干细胞 的帖子) t( ^) @" ]' v8 A, ?- B

. X8 M1 F0 o: c9 A  Q恩，是的

jefferson

; W* _; {- R# S

( r9 f# T4 K, c2 Z请问LZ这本是什么书？
8 v; v8 g' a, ?; ?; H( y
& D! J" Q* D3 B7 p来源雌性的ES细胞系，在某些方面确实比来源雄性的不稳定些。* ^: d6 L- r* X. b# T/ L

" a5 ]8 I: Z- k( m在遗传稳定性上，有报道说ES细胞在长期培养过程中发生的获得性变异多发生在12, 17和X染色体上；- [. G0 H4 W( W7 \2 s
在表观遗传稳定性上，来自雌性的ES细胞在X染色体失活方面有着不同的差异，有报道在一些来自女性的ES细胞系中，没有观察到X染色体的失活。从这点上来说，来自雌性的ES细胞，表观遗传稳定性还是有差异的。
/ }( C3 |" c0 q
; |8 j8 P# e) K  f+ `8 ]! G7 q因此虽然一般的基因打靶不会靶入到性染色体上，但相比雄性来源ES细胞系，雌性相比而言确实稳定性稍差。
% D: {+ B. a( F! G; s9 [% m5 H9 W, d8 X$ v% Z8 [7 h
不过这几年，做干细胞打靶的研究越来越多，但从没看到过说只能打雄性干细胞的说法。大概搜了几篇PAPER, 都用到了女性的ES做的打靶。
0 q1 p4 b" t7 U+ L3 Y. b1 @9 I- L* Z0 ?0 p, I
1. Gene targeting of a disease-related gene in human induced pluripotent stem and embryonic stem cells. Cell Stem Cell. 2009 Jul 2;5(1):97-110. Epub 2009 Jun 18. 用的是H1 (Male) 和H9 （Female） 细胞；
7 r, R, A- m3 x) _3 g6 S3 H5 M2. Generation of platform human embryonic stem cell lines that allow efficient targeting at a predetermined genomic location. Stem Cells Dev. 2009 Dec;18(10):1459-72. 用的是H9 （Female）细胞；
* c) _7 q  G0 e3. Highly efficient transient gene expression and gene targeting in primate embryonic stem cells with helper-dependent adenoviral vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 September 16; 105(37): 13781–13786. 用的是KhES-1（Female）和KhES-3(Male)细胞。
8 N; O# q* d* \; ]  `9 {5 Z, H. [) J& k2 y8 w4 P) W: m
因此，个人觉得，LZ书上的这个说法，是否有问题？

ying

前几天听了个讲座，貌似确实有此一说。他的解释我忘记了～那个讲座是个中国的做敲除的公司的技术人员，应该讲的靠谱吧。