请教酶消化法培养脐带间充质干细胞的问题

细胞干

我用的是0.1%二型胶原酶消化4小时，0.25%胰酶消化30min，但是细胞养几天就死了，请问是不是胰酶消化时间太长，过度消化所致啊？

aochongyu

我们一般用现成的胰酶，方便快速，你们用什么培养基中和啊？

tess1029

用一型和透明质酸酶混合试试

2013sp

回复 pailishi 的帖子2 L9 b# v( H7 E) O) [( C% h1 d

6 J6 f7 B/ A6 k9 ^" {" k# b请问使用哪三种酶以及浓度、用量。
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pailishi

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0 W* u3 T# T/ @1 @' s; g
1 L9 U. d& }* I7 h9 \自己去查别人的硕士毕业论文吧，详细得很

2013sp

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用哪三种酶消化，三种酶的浓度与加的量各是多少？？？？？？求教，谢啦！！！！

2013sp

回复 pailishi 的帖子1 q" Y% G: B, E+ s

  D1 ]# E* d- }) {9 g+ `跪求酶消化法培养脐带间充质干细胞的操作步骤。

2013sp

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6 I8 T/ ^4 R8 F0 }9 M( j3 ?) s. w
+ w$ q0 `% P" q0 D跪求酶消化法培养脐带间充质干细胞的操作步骤。

mengnancy

开始培养脐带间充质MSC时，我用0.1%的I型胶原酶消化，消化过后没有用PBS大量稀释、清洗，细胞受损伤，虽然有大量的细胞，但是由于有胶原酶附着，细胞也被消化了。组织块培养7-10天，就有MSC从组织块爬出，更容易得到MSC，为什么要用酶消化法？

wangling0607

回复 细胞干 的帖子& o  Z. V0 U# B5 R
. p5 w/ q/ I# E; K4 c; X  F& N, q( r
我一般的做法是不是全把上清去掉，慢慢吸，剩下最底下的1-2ml，这样保证细胞不会被倒掉。
; O& @0 j. W/ R1 F4 i$ |0 }# T! R/ h我之前做过拿胰酶消化的，感觉效果不明显，还增加了步骤和污染的机会，所以没用胰酶了，感觉也挺好的，应该是先过滤再离心，这样大的组织块就可以先去掉了