求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
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& Y! A2 n: U* T* K问题如下：: ^! z% X4 I* r, ]
     1 EB逐渐脱落散开的原因？
: j- Q; P  p; [0 k+ B     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？
2 U  R! i% m3 ?6 D! p* a& w$ v8 C   ; R# V6 ]" G6 b0 m; T4 K
                   谢谢！

bio-bin

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% n$ B; B/ n9 I# c+ {8 S
- @. u9 ]! P: N- }8 [  C: `我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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) K9 I. x+ w& }; h4 V9 K
2 u0 K& D3 O9 y5 N* s7 E做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
5 N" Q4 c& u8 b# h. \
# X: l/ r2 O2 C% p, z) J2 \5 `另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

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. l. I5 l5 a! M( A& o& T. `/ t3 f7 w' ~- U/ |, ?: @
恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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8 B1 Q& R, m% \; c
GIBCO

echoxy1020

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* p$ s5 s: H; Z6 P9 M: ~' h
: f9 ^1 F( L  q- A" e, S请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。