求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
! }0 h9 \& ^# {" B7 g; P7 V& O  I7 E1 K6 C$ k# O* q8 {! A' Z% G
问题如下：
) ]( F6 `* J7 `  z# j) Z/ ^     1 EB逐渐脱落散开的原因？
* c# P% }3 ^) k     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？) g: a7 N" K$ b  q4 M' S2 f
   
& g4 H8 D4 _; c# e5 t7 l. f                   谢谢！

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。

echoxy1020

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  f1 [- ?% f+ ^- d; L" s" ~7 f- D( `- f0 ]; P8 F  }% y
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

jefferson

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) c0 O2 U: b4 s- V- @# [/ B
7 y2 @6 s/ f8 S5 }GIBCO

ligangtiancai

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7 d1 H3 u8 h" j0 B2 y; Z0 r% v; m. h% ~6 |
恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
, _0 P4 s- W% u. B( r) [8 y/ n# \
: [5 Q# c% G+ P. U另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

回复 bio-bin 的帖子, }$ _' `: t9 w; t( T0 i; x

) ]% H5 S% r! y, |做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

bio-bin

回复 ligangtiancai 的帖子. c8 u. r3 Z, V5 _. t$ S
- [$ s4 K* r7 q; t5 {, O: V
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？