求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。1 y6 T7 k& r) f5 h1 O

! ^8 b! g" a( P问题如下：1 {8 C- D% c8 ~4 M
     1 EB逐渐脱落散开的原因？) @$ q1 m& \0 H1 ~
     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？
6 m- [5 \7 Q. J   
: e, k% ]% w: ]" X$ J0 H                   谢谢！

bio-bin

回复 ligangtiancai 的帖子  t& @) c- q* Y. w, q8 R; F

5 x1 \# O1 @# Y) g+ F% S我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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  }- S( m# T5 G3 L6 I' Q. o7 }* R" `5 @' L$ N6 P3 H+ \
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。) ^) B3 v2 y% h/ j  ]! y$ ?0 C8 E
% \% W; j4 N' t
另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

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, c$ a2 K+ D4 ^7 ~& q: q$ B
! T% o: T$ A2 W, k/ `: _, X恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

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! }) W! a* Z1 E. p! Z* ]: f8 Y' J$ ^1 q$ T3 _
GIBCO

echoxy1020

回复 jefferson 的帖子3 D0 N& j  q( g+ j& e) T
& M" y- x% t, Q
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。