oct4 基因在普通细胞中表达吗

fanmihu1987

近日在普通细胞中提取RNA，反转录，扩增出OCT4 NANOG 基因。求指点

song58

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3 x1 f" o. W. V' k
什么普通细胞？有用什么处理过吗？

igdb

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" }3 ?3 l' e/ i8 u4 D& Z是否是假基因？建议设计跨内含子的引物重新作一下

fanmihu1987

普通的成纤维细胞没处理过。 引物是跨内含子设计的 每个基因不止一对

新疆八钢

回复 fanmihu1987 的帖子  T. x, v3 M5 h  U: S! D' a, k
2 j' C3 a" Y! ]/ r, M
普通细胞没有做过，肿瘤细胞系表达很高

jefferson

是做的什么PCR，这些基因在HDF细胞中是不表达的，或者，表达量相当低，普通PCR或者RT-PCR应该都难以检测的到。0 ]3 K# a2 I  G8 }7 Z5 {
& f; j( N1 o6 E. v$ h
但在一些Paper里，在做ips的鉴定时，用Q-PCR检测多潜能性基因的表达量时，有的是用HDF作为参比的。就是说，扩增HDF细胞中的这些基因，包括OCT4,NANOG等作为标准，其结果定义为1。这样的话，说明在HDF细胞中是可以扩增到的，但我扩了两次，量太低或者没扩出来。

fanmihu1987

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# h9 F* x" e  ]! p2 H# h# V% T+ m/ X
4 o# @. X2 `; @/ E$ y2 ~; _5 M我就是普通的RT-pcr,普通的胎儿成纤维细胞。条带清晰

jefferson

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; \. l- k' e% t, g- e, d# q! c+ O( ]& B
很有可能确实是表达的，尤其是在胎儿的细胞里。
, ?: `  e$ N$ q  ]2 y# U; ~% F) T5 b, \5 h# W8 M
想起来以前做过一次RT-PCR，在成人HDF细胞中也扩出了NANOG。
; |& |5 O9 U9 N# Y) o2 x6 C& Y& Z$ }+ }8 x
是否是这些基因在成体细胞也表达，但量较低而已？

song58

回复 fanmihu1987 的帖子9 C5 \" O( U1 E9 g
  C' Q7 L) O- s2 O" e$ \, I
细胞分离过程没有被其他细胞污染吧？+ Z2 Q3 m$ N& v: d, l
或者胎儿的就有一点？
) u  t% ^1 Y% O或者再检查一下引物？找个以前测过的阴性对照再P一下吧？

lcxlorna

普通的成纤维细胞应该P不出来，考虑细胞污染等问题。