oct4 基因在普通细胞中表达吗

fanmihu1987

近日在普通细胞中提取RNA，反转录，扩增出OCT4 NANOG 基因。求指点

song58

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什么普通细胞？有用什么处理过吗？

igdb

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( u/ [5 n5 H; s是否是假基因？建议设计跨内含子的引物重新作一下

fanmihu1987

普通的成纤维细胞没处理过。 引物是跨内含子设计的 每个基因不止一对

新疆八钢

回复 fanmihu1987 的帖子$ |. e7 Y7 y; @/ Y& ?
$ ?: X- @$ i& i6 k
普通细胞没有做过，肿瘤细胞系表达很高

jefferson

是做的什么PCR，这些基因在HDF细胞中是不表达的，或者，表达量相当低，普通PCR或者RT-PCR应该都难以检测的到。- n) f" z5 R  V. y* L0 Y

- W  F6 Y  u/ ~- x但在一些Paper里，在做ips的鉴定时，用Q-PCR检测多潜能性基因的表达量时，有的是用HDF作为参比的。就是说，扩增HDF细胞中的这些基因，包括OCT4,NANOG等作为标准，其结果定义为1。这样的话，说明在HDF细胞中是可以扩增到的，但我扩了两次，量太低或者没扩出来。

fanmihu1987

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4 @- z6 ?* s3 W  h7 C5 X& g' A' O( C7 L+ U" A; h
我就是普通的RT-pcr,普通的胎儿成纤维细胞。条带清晰

jefferson

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' X9 f  V/ \3 _/ x) i6 a1 ^! ?6 [
很有可能确实是表达的，尤其是在胎儿的细胞里。' k6 @1 R) Q) q

. w6 b) o9 B% U- a+ v8 l% h想起来以前做过一次RT-PCR，在成人HDF细胞中也扩出了NANOG。
' h0 |0 B$ m' Y8 E, x0 k1 u9 @6 a
是否是这些基因在成体细胞也表达，但量较低而已？

song58

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& t! k3 g4 d& a5 V
细胞分离过程没有被其他细胞污染吧？
! b) W: M  U5 B) J! w2 A% @. y9 ~或者胎儿的就有一点？7 s2 P* l+ |' }/ B1 D0 C, v% Y
或者再检查一下引物？找个以前测过的阴性对照再P一下吧？

lcxlorna

普通的成纤维细胞应该P不出来，考虑细胞污染等问题。