oct4 基因在普通细胞中表达吗

fanmihu1987

近日在普通细胞中提取RNA，反转录，扩增出OCT4 NANOG 基因。求指点

song58

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' M/ {  R# i  L" Y4 R什么普通细胞？有用什么处理过吗？

igdb

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) T7 j3 K- S) ]& _5 m6 K, i' b+ j7 O% f- f. w8 J* T. I  j; k
是否是假基因？建议设计跨内含子的引物重新作一下

fanmihu1987

普通的成纤维细胞没处理过。 引物是跨内含子设计的 每个基因不止一对

新疆八钢

回复 fanmihu1987 的帖子0 c5 L9 d5 @+ |( @1 k

$ a3 \& c$ H6 p" p1 V普通细胞没有做过，肿瘤细胞系表达很高

jefferson

是做的什么PCR，这些基因在HDF细胞中是不表达的，或者，表达量相当低，普通PCR或者RT-PCR应该都难以检测的到。% P# a. c$ G3 m  Q/ s$ b: k

3 q* _; L; q( d6 s/ ^9 T但在一些Paper里，在做ips的鉴定时，用Q-PCR检测多潜能性基因的表达量时，有的是用HDF作为参比的。就是说，扩增HDF细胞中的这些基因，包括OCT4,NANOG等作为标准，其结果定义为1。这样的话，说明在HDF细胞中是可以扩增到的，但我扩了两次，量太低或者没扩出来。

fanmihu1987

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4 x) y% r& r; J6 N* L" g% J
% P( U9 P2 o7 x我就是普通的RT-pcr,普通的胎儿成纤维细胞。条带清晰

jefferson

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  }9 }8 g5 V0 W7 E8 H! N  w; \
6 w, d- j3 {: f" n! @! w3 o, |, f很有可能确实是表达的，尤其是在胎儿的细胞里。; G; z: q/ C: H
" \% G$ v( ^7 K1 Z( x, ?( p2 Z/ K
想起来以前做过一次RT-PCR，在成人HDF细胞中也扩出了NANOG。; I2 v+ [, b5 u9 i. e' W* Y
4 E. j. g6 s2 O" k0 g6 c2 }3 j
是否是这些基因在成体细胞也表达，但量较低而已？

song58

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8 e# l5 ?: k4 A% ~& k. \" {
" g: L* N2 W- Y) r4 f细胞分离过程没有被其他细胞污染吧？6 M5 d4 F, n. y" p, D2 y3 e
或者胎儿的就有一点？9 A$ |9 M/ s9 K; ]9 ~' K
或者再检查一下引物？找个以前测过的阴性对照再P一下吧？

lcxlorna

普通的成纤维细胞应该P不出来，考虑细胞污染等问题。