oct4 基因在普通细胞中表达吗

fanmihu1987

近日在普通细胞中提取RNA，反转录，扩增出OCT4 NANOG 基因。求指点

song58

回复 fanmihu1987 的帖子& E) r+ [, A' _3 t# L
+ p( x3 T$ A8 ?; f+ D' J! l% c/ W
什么普通细胞？有用什么处理过吗？

igdb

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( l. ]% \# `. @6 y# q
+ Z+ ?1 f, c0 O; t是否是假基因？建议设计跨内含子的引物重新作一下

fanmihu1987

普通的成纤维细胞没处理过。 引物是跨内含子设计的 每个基因不止一对

新疆八钢

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. u# i; A5 H9 m  r% _! g" l# a4 r
% ~" ?* \# _4 g& B7 S普通细胞没有做过，肿瘤细胞系表达很高

jefferson

是做的什么PCR，这些基因在HDF细胞中是不表达的，或者，表达量相当低，普通PCR或者RT-PCR应该都难以检测的到。; |4 q$ a+ i, v/ t6 J# Y
  S+ d( Q) z$ a5 _. S6 V, Y1 M
但在一些Paper里，在做ips的鉴定时，用Q-PCR检测多潜能性基因的表达量时，有的是用HDF作为参比的。就是说，扩增HDF细胞中的这些基因，包括OCT4,NANOG等作为标准，其结果定义为1。这样的话，说明在HDF细胞中是可以扩增到的，但我扩了两次，量太低或者没扩出来。

fanmihu1987

回复 jefferson 的帖子- g! g: k, i: f' P  q2 A
- N5 u( H7 {1 A8 B' ?+ }
我就是普通的RT-pcr,普通的胎儿成纤维细胞。条带清晰

jefferson

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1 H6 ?; ~  r% M4 Y, u* D& w) V* e  G6 E3 E; a: J
很有可能确实是表达的，尤其是在胎儿的细胞里。
1 X+ e3 E4 N" \8 Z& o0 L  d8 c4 D2 N% F( {+ z2 o4 u
想起来以前做过一次RT-PCR，在成人HDF细胞中也扩出了NANOG。5 u: h) M* a! z- o2 O) a

% l" {' g/ \" R3 w  j是否是这些基因在成体细胞也表达，但量较低而已？

song58

回复 fanmihu1987 的帖子- ^9 _! T: E* D; E
5 N! E: L. z5 x9 Q( G
细胞分离过程没有被其他细胞污染吧？
0 Y- b; i3 w1 b6 w4 y/ |+ ^或者胎儿的就有一点？
  i! K5 u8 Z1 R: \, [  G6 b或者再检查一下引物？找个以前测过的阴性对照再P一下吧？

lcxlorna

普通的成纤维细胞应该P不出来，考虑细胞污染等问题。