关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

chenks

就我的经验来时,小鼠ES细胞不是那么容易分化的.Feeder+普通的mES培养基+lif;Feeder+KSR+Lif; N2B27+2i+Lif有无Feeder均可;三种方法都可以.注意的是Feeder时3天传一次.每次1/100-1/200;无Feeder时,最好计数,6孔板每孔10万.

细胞海洋

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李夏

我用的是无血清培养，因为要筛药 不能用血清培养，无血清培养传个两三代就分化了     有没有高人指点一下啊  感激不尽啊

wlj0912

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mef 铺的厚一点可以吗，我以前发生分化是因为饲养层太薄了，后来多传了几代细胞又恢复了。

YYQ6301

郁闷呐，我们这次复苏出来，直接就有分化迹象了

vegetax4132

我们实验室前段时间一直用KSR+LIF+feeder养    状态很不好
, n* T, L9 c4 `: A最近换了MES+LIF+feeder   状态挺不错的

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定% [+ C/ H" B! j1 c& q* v
个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂, M0 M* T# h- \! ?
可以尝试挑克隆，再扩起来看看
. H, K: a4 ?8 {, e/ ~2 I

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....: