关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

scienese

你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用

YYQ6301

嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度+ ^# v# _3 z9 C: }# b. Z  |

cochongg

有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。4 H9 Z! D' V  W  ^1 x
具体还是要看整体细胞状态。
; |* ^/ y+ E& i5 X0 J建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。+ v  N+ S3 W. F+ v5 W
2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧& T& H. k7 a/ `5 E: i7 V
3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）5 q; d) _5 x( F7 W
* V5 |- S; N6 q" f4 m
希望对你有帮助
/ E2 I, ]) \: n+ Z

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子' ]7 m$ o. B7 z" a2 y
: U; C! d+ G+ \* _
这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!

cochongg

回复 YYQ6301 的帖子) ]& T2 l) _9 }
; A3 A4 f8 h9 ~* m3 I2 u
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。
8 V3 d0 ~8 }! G- J. z& V我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。
0 v% p8 Q1 m3 \( \, g- b2 H; f原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子# q, d7 _) j5 z, O5 M+ y4 t) o
, W/ |# ?5 D) f! e- t0 o
嗯  那就放心了  主要是boss总觉得我们细胞养不好  郁闷的

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....:

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定6 x) L- V0 t+ h# x
个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂
  c; y# Z2 d% c可以尝试挑克隆，再扩起来看看
6 O" H4 q' `: x2 O8 |. |

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵