关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

scienese

你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用

YYQ6301

嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度' x  j1 B- n& H

cochongg

有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。
7 q) F9 M- f+ s. u$ L" y* H具体还是要看整体细胞状态。9 N: s9 k# e" r5 g: Y2 b1 q
建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。8 ~, X: H( d5 W# z& d
2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧' e3 ^" _/ s% Q; b
3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）
  c2 B: l+ M" z# f0 u
. q0 q8 i6 N# h5 ?希望对你有帮助
  M7 C6 v+ p5 B' I/ d6 P+ r

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子
4 a3 i/ h& ]: e
$ ~+ W6 t0 Z" `这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!

cochongg

回复 YYQ6301 的帖子1 @8 {* b: o% F" a( g  Q
4 |& M9 j+ q( [# v  Z/ X
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。
* T+ {% G# n* |8 L我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。0 D/ L: z+ O% s7 ]: U
原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子
# v9 y/ H' \$ }$ N0 l' N1 U' F- P: g5 H3 T- K
嗯  那就放心了  主要是boss总觉得我们细胞养不好  郁闷的

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....:

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定
, [1 v9 B; ]6 y; O! @个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂4 ~( D) L/ B" D5 \1 U! V0 k. q
可以尝试挑克隆，再扩起来看看
" [0 g% C( s/ C) U

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵