关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

scienese

你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用

YYQ6301

嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度$ P5 V6 d7 S# _

cochongg

有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。
9 K! }/ L/ K  S3 ^$ k& Y( q& K8 E8 W具体还是要看整体细胞状态。
3 M3 x$ Y& E+ @2 M4 r9 ~1 g建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。- z* X2 f% j& ?1 w( [* N
2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧
3 v$ E, i. G: @7 z, M+ e! e8 C3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）
9 p$ M( h1 X0 F' m& i7 ]
, Y. Z0 U. t7 _3 N1 Y3 Z希望对你有帮助
5 i, A0 v# m; \  _

YYQ6301

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$ p0 l4 M: X2 y2 a  X4 W1 g+ T1 y1 T: v
这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!

cochongg

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% W$ i# t( N0 {& x5 ^' f, v" t$ ^+ i" \; w& a
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。# u  A8 I" m0 f$ D8 z5 W3 n! j, s5 L
我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。6 f8 ?& J8 g' U" k6 j
原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子0 F( b: ^2 ~' [+ ]6 R2 `

! o( p5 S( u  Q: \  D- W" M) s: t: [2 o$ Z嗯  那就放心了  主要是boss总觉得我们细胞养不好  郁闷的

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....:

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定
! ~& o9 u" r) j( Z" v个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂
% d, c' F) J8 @2 \8 t" }* N5 W" |. w# G可以尝试挑克隆，再扩起来看看
, ]* E1 m- ?" N8 _8 g4 F& I

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵