错在哪一步，望赐教！------谈脐血分离MSC

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具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白膜层不是很明显）---PBS洗两便---一部分养在DMEM中想得到MSC，另一部分养在EGM中为了得到EPC（用的是培养瓶，没有铺胶）------可三天后换液（换液时没有发现贴壁的细胞）------换液2天后发现瓶中仍没有贴壁的细胞。结果什么也没培养出来，步骤中哪一步错了，望赐教！

丁丁儿

那请问你见到细胞了吗？就算没有贴壁的，在显微镜下观察应该也能看见细胞啊 ，再说了，红细胞裂解液本身就对细胞有影响，很可能导致细胞死亡，试着变化一下红细胞裂解液

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) ^  U0 @0 |& {7 Y4 W
: V6 s. ^4 S- F" L! B你指的是取原代时不铺层吗？

Demon_CN

试验前准备。. h% [# e+ A$ W4 X4 v
个人觉得你要准备经过TC处理过的培养瓶
7 j$ c2 w5 [( e, a$ l6 z培养基，L-DMEM+10%FBS（血清里还有丰富的营养，还有促进细胞贴壁的因子这个是以前学长告诉我的，不要问我具体有什么因子）4 P' E) z0 t. ?1 B: @$ k" y
开始做试验
- Y) h. `' D3 A按照你的操作，我觉得问题不太大
( c0 d& N7 J9 k具体你的接种密度多少，我接种纯的MSC是1*10^4个/m2 ,不知道那个里面msc的含量，感觉这密度长的最好
1 X% J& Y( Q9 \! r一般第一次贴壁要长点时间到概4-5天，第二次传代2小时就贴壁了

henryjia

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0 ?& z8 i: n# \1 i建议铺层，但是我确实实验过不铺层，也一样能长。

542177563

回复 henryjia 的帖子7 }- U. `; J6 W& t+ V5 k4 |

7 A: G0 P& i! P4 D养EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

Roden

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4 A" E3 o( n, H" C, W5 Y( q4 W& P6 v: ^( W; |
脐血间充质的成功率大概在20%~30%，楼主可以一气儿多养几个。3 K8 N) l$ K+ ^6 c0 V) ^6 Z3 V% G
贴壁细胞呈集落的速度与细胞自身和培养环境都有关系，不知今天爬出来否？

henryjia

首先，RBC裂解没有必要；直接梯度离心以缩短离体时间；再者，长出细胞克隆一般要8-10天，耐心，淡定。
  x8 Y  a6 k2 }! z0 \2 @
  |! M9 Q) u" O: b如果用EGM2培养液提取EPC是一定可以的，脐血EPC比MSC多多了。千万要注意一个问题就是不要因为担心其他细胞污染，就过于频繁换培养液。
  Q" w- r; p/ s. g  a" y' e
* n8 P8 k/ t6 W# o. Q3 Z+ g6 j) u祝好运。

wind789

回复 542177563 的帖子* v$ q8 A) `7 i( u4 S" r0 X' |/ {
" [6 {& x* u! ^
我们也正在摸索脐血MSC，推荐一篇文章给你。共同加油！

evial

裂解了就不要去分层，不会有分层，上清都是不要的东西，沉淀下来的才是你要的东西，你把孩子当垃圾倒了，当然后来就没有孩子养的出来了