胚胎干细胞转染外源基因，用什么系统比较好？

bigsnow55

请教大家，向mES和hES中转染外源基因，用什么转染系统比较好，慢病毒，逆转录病毒，还是普通质粒？6 p1 _& e; [% r7 B* v
谢谢！

guoanson

pRLenti可用~~

Yedan

Retro的会沉默的。Lenti是主流，当然还有电穿孔，但是得有条件

cochongg

电穿孔最方便吧

wwy551

回复 bigsnow55 的帖子9 h6 D3 }( G! Q

# _$ k. g2 v& b建议使用慢病毒体系转染。目的基因可以整合进宿主细胞基因组，能长期稳定表达。我们实验室之前通过慢病毒体系向hESC转染HOXB4+EGFP，一年半之后重新FACS分选带有HOXB4的hESC时，表达强GFP的细胞比例还能达到85%

chinesezhang

回复 cochongg 的帖子# S# N0 u  e' }) Q

. F" x- b9 i1 v% ^6 T# d您那有没有电穿孔转染hES细胞的protocol？如果有的话能不能给我发一份，邮箱zhangxj@ioz.ac.cn，多谢！

sdjjfangfang

回复 bigsnow55 的帖子. R; e# r9 a$ o2 q% y
- K1 Y, ?" W8 l
用什么系统要根据你的实验需要来判断，而且不同的转染系统对于质粒的要求也是不一样的。如果要求长期保持基因的表达水平，最好还是选用慢病毒，如果不要求长期表达，可以使用质粒转染（结合电转），或者是普通的转染，但是效率会特别低。

kalaka

慢病毒合适的质粒有哪些？什么样的启动子比较好？

bigsnow55

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请问你们用的慢病毒骨架是哪种，整个系统能否介绍一下？2 L" w( {* H$ ~0 X  l# D. c
多谢！！！

bigsnow55

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一般的电转仪都可以吧，参数如何设置呢？