胚胎干细胞转染外源基因，用什么系统比较好？

bigsnow55

请教大家，向mES和hES中转染外源基因，用什么转染系统比较好，慢病毒，逆转录病毒，还是普通质粒？
% Y: }' a" z7 x0 f3 ]9 e) h谢谢！

guoanson

pRLenti可用~~

Yedan

Retro的会沉默的。Lenti是主流，当然还有电穿孔，但是得有条件

cochongg

电穿孔最方便吧

wwy551

回复 bigsnow55 的帖子6 E( z- B4 q% @3 T, R3 a% J( L6 ]

! _* A0 X0 {9 m$ Y& \建议使用慢病毒体系转染。目的基因可以整合进宿主细胞基因组，能长期稳定表达。我们实验室之前通过慢病毒体系向hESC转染HOXB4+EGFP，一年半之后重新FACS分选带有HOXB4的hESC时，表达强GFP的细胞比例还能达到85%

chinesezhang

回复 cochongg 的帖子8 b( S! E7 h2 E. u) F5 d7 I9 L# ~
. P2 f" g5 w' `  Q. f# T6 m" Z
您那有没有电穿孔转染hES细胞的protocol？如果有的话能不能给我发一份，邮箱zhangxj@ioz.ac.cn，多谢！

sdjjfangfang

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' A& S/ ]7 i8 d  U7 W0 M: h6 K9 X% b0 }& b1 b" Y
用什么系统要根据你的实验需要来判断，而且不同的转染系统对于质粒的要求也是不一样的。如果要求长期保持基因的表达水平，最好还是选用慢病毒，如果不要求长期表达，可以使用质粒转染（结合电转），或者是普通的转染，但是效率会特别低。

kalaka

慢病毒合适的质粒有哪些？什么样的启动子比较好？

bigsnow55

回复 wwy551 的帖子
) D) u. f) E9 o6 h3 t( K& W% ]6 g% ~1 e. `/ [- h
请问你们用的慢病毒骨架是哪种，整个系统能否介绍一下？
  F9 @+ L5 z) z/ p多谢！！！

bigsnow55

+ d( P4 W5 C! |+ n) R! j

* y& O8 F* I9 I一般的电转仪都可以吧，参数如何设置呢？