胚胎干细胞转染外源基因，用什么系统比较好？

wwy551

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; R; ?: R/ {% H6 _3 ~+ Z$ H
转染的目的基因连到慢病毒载体上，我们实验室用的慢病毒载体有pLL3.7和pCDH，这个关系不大。293T包毒，磷酸钙沉淀的方法共转染带目的基因的慢病毒载体以及另外三个包装质粒VSVG，MDLG，REV/RSV。

christophe

回复 wwy551 的帖子) F3 ?$ D8 H, \% Q: S# P! K4 a8 t
! W9 D; t* e! l2 z) _. v) n
PCDH有好几个版本，你是用的哪一个promotor的载体？你的pLL3.7是带puro筛选的还是EGFP报告基因的？

bigsnow55

% i& i. @: _+ r  O$ M* v
! x* P! N1 X" s' V4 f回复 wwy551 的帖子
( W4 |4 j* e( K& `9 z3 N7 X  A
" t$ p) G& S) i- p$ t& ?) R我想用PLL3.7构建含目的cDNA的慢病毒表达载体，转染hES。但听一个香港的朋友说：pLL3.7 lentiviral system only allows shRNA expression and not cDNA. 请问这是真的吗？

chutu

pLL3.7确实是一个表达RNAi片段的载体，用的是U6 promoter，不适合表达蛋白基因。楼上所说可能是自己改造过了这个载体，比如把promoter换成CMV之类的

细胞海洋

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% W! B, j& l. v1 ~* M9 X. W/ w8 l$ _9 S' z9 Z
看14楼

hynew

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; p7 p# ^6 W1 k; _, E3 `& X8 @* b( |8 ~; o
您好，您说在hES中用PLL3.7构建含目的cDNA的慢病毒表达载体，转染hES稳定表达HoxB4-GFP，具体是怎么改造的载体，是否将U6 换成了EF1a promoter？谢谢！能否帮我问问原来改造的人？不胜感激！

细胞海洋

回复 hynew 的帖子5 [* U2 R4 H3 A
) r# N+ t9 t" R! }9 b( w
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elvacxx

追求高效还是Lenti吧

qq007www

我是用质粒核转的，想过不错

xan36

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5 f) _5 v! J, z4 o/ @5 i% U) N" c" {; w; x( U% N6 |
请问，你是用来诱导造血细胞吗？那HOXB4的vector是什么呢？Migr1载体吗？  `1 p0 ^8 k) V
谢谢！