【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

wagumaxida

" Y. M7 w- v6 b, S+ `9 b9 F9 o" J4 E6 J1 K9 c0 R7 C
主要有几个问题亟待解决/ b* P, [0 y- d$ h+ M
1.外周血分淋巴细胞时，梯度离心去除血小板时，离心梯度是怎么设置的？4 H' q& v8 Q5 _
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：
! o5 b) E, l& p* L  A.贴壁时需要加血请吗？需要加细胞因子吗，需要的话加哪些，量是多少？: |/ Z. _9 i6 N2 r+ \/ z$ P
  B.贴壁时间是多长时间，2h还是48h？: l9 k* M0 v( m- p& @# c
  C.贴壁时是在培养瓶中好还是在六孔板里好？7 ]' z; M3 z$ U" A$ r8 m# s
  D.这一步还有什么要注意的吗？0 k# j' X0 L7 e+ c
3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：
5 i2 I% _6 c9 q/ p. k" T  A.换液间隔怎样？半量换液还是什么其他方式？3 [, B7 Y& }" {* w+ _( Q# X
  B.换液时所用培养液中因子的量是多少？  c2 m5 D2 D2 k
4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：/ j" T& [: c0 h
  A.在第几天开始诱导？
. I0 h- Z; L4 K9 c9 K6 V, T3 w( q0 Z  B.用什么因子或者药物进行诱导，量是多少？
3 {+ E! x2 q/ q  G$ f+ g9 S  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4之类的吗？0 D# |# n# G5 z& K$ E* U) u" |
  D.诱导多长时间可以收获？* h+ e7 e9 ], `
P.S. 如果要用荧光腺病毒感染的话，在第几天哪个阶段感染会比较好？) Y) _! C2 d0 y: V( r- y$ ~

8 c$ D1 ^& o& I: ^- r: M非常感谢！

细胞海洋

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, S$ F) [, y$ [4 {5 l& ~+ B+ S5 N! t8 Z% d1 C- ^5 X6 H
看14楼

大少爷

是的，50ng/mi! n8 q7 N9 B: q& ?# r0 }

hwlightning

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  Q( x8 D: h# V4 u
& g2 Y2 j0 _6 V  Q* l请问你用的是不是PEPROTECH品牌啊- `6 r2 Y8 {! Z2 U
IL-4的浓度会不会太高了导致浪费因子。

Tevirly

回复 大少爷 的帖子. J3 M2 n! \* C) B% J
! z3 F3 ?9 d/ V) f
请问如果用培养皿培养单核细胞诱导DC的话，用哪个牌子的培养皿比较好呢

deshenglll

学习，受益。

大少爷

活性单位U与质量单位ng好像没有换算关系，每种抗生素好像都不一样。。。

hwlightning

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' [% `1 A6 @1 ~7 }0 j, p8 s1 }9 S( v1 d! c
活性单位U与质量单位ng怎么换算啊？

vanessa

大少爷 发表于 2012-5-18 22:16 5 N2 ^5 E& F% I. {. L
1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10mi ...

: m* ]3 i% ?: K" E第一步我们一般是根据淋巴细胞分离液说明书来进行操作的，一般国产和进口的Ficoll离心力会有所不一样。

hwlightning

回复 大少爷 的帖子  Q; K+ J8 t+ ~% C8 y# j
  i& ]' f, n. {+ Y
请问下GM-CSF,IL-4和TNF-α国产的就行还是要进口的？能推荐下厂家吗？