q-PCR时引物设计问题

如来的观音

据说，实时定量引物设计时产物长度最好控制在80-150bp间较为合适，有这种说法吗？

刘艳85

最好是这个片段长度，若是太长也可以批出，但是可能有的结果就不那么可靠了吧

刘艳85

最好是这个片段长度，若是太长也可以批出，但是可能有的结果就不那么可靠了吧

nankou2008

这个是有的 主要是为了扩增曲线好看稳定 太大的话
/ M" W0 T7 E* |3 W; e仪器公司工程师有过介绍的" U( h$ A7 D9 y0 d2 e2 t
我们当时说是70-250bp

lazyworm

应该是不超过250bp，我刚开始做时用了个500多的竟然p出来了，不过还是小一点的好P。当然设计引物时也不能太小，如果和引物二聚体差不多大的话不好区分。

daviddow

shi

casc007

回复 miRNA 的帖子/ o/ _# ~' m6 R1 }- K0 X* i% S

; h& a* G% Q5 f. x% u, o这个大小决定因素不在于酶，而是染料

casc007

用SYBR等不饱和染料时是这样的，用饱和染料就无所谓了，但是也还是建议越小越好，体系比较好把握

miRNA

现在公司的酶都很NB，所以，可以将范围扩大到80-250，有同学用400，他说也可以...
; @, e/ |7 \8 a+ [4 N祝你好运...

不倒翁

是的 Rules:
" b, j$ Z; z( R+ m. C# K1.        Amplicon size should be ranged from 90bp to 180bp;
* k, g. g/ r, x" ]# i+ C2.        Oligo length should be ranged from 17 to 20bp, normally;5 a/ R3 Z4 Z# D: Q, v
3.        Ideally, the TM value should be 60℃, but 59℃ to 61℃ is acceptable;  Z. Z9 f6 g; G. {
4.        The TM value of one pair primers should not be different at more than 1℃2 l; N& f. N) {
5.        GC content should be 45% to 55%
5 L! L5 V: `5 j, V6.        The oligo designed should be located in different exons.
$ Z! Y7 {, Q& \