求高手指导我的小鼠bmsc长得怎么样，谢谢

bty007

我用了两种方法取干细胞，①全骨髓法充股骨胫骨骨髓，②酶消化骨片法消化颌骨。
) U2 C* q3 w( L5 p% w目前养到原代第八天，骨片法长出一点像干细胞似的了，骨髓法还都是圆形的，这样正常吗？5 {# @3 E3 M1 d6 k& U! M3 Y- y
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骨髓法24h半量换液，72小时全量换液，之后3天一换。刚接种时细胞很多的，感觉细胞越长越少，是污染了？细胞死完了么？
, d  @2 L8 M+ X9 Z  j骨片法72h半量换液，之后3天一换（下面有梭形出现的是骨片法的，是小鼠间充质干细胞吗？长得正常吗？）
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wcfeng88

倒数第二张图片的细胞还有救，消化后转瓶培养。换液的时候，留下一些旧培养基，不要全部换掉。

bty007

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# U+ ?5 o# I" b+ W. T6 [谢谢~上面的圆形细胞都是死掉的吗？它们一开始就是圆形的，应该是贴壁了，换液换不掉，不可能再长了吗？  R, c+ J' N* @& `
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下面梭形细胞的只是培养瓶几个小范围里长出来的，不是满视野都是这样的，量还很少，不用等它再长长再换瓶吗？就是感觉其它组织块会不会也在慢慢长出来这样的细胞？

bty007

回复 wcfeng88 的帖子  u$ V: w) L2 Z! P
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还有，请问，是不是每次换液都要留下点旧培养基？我有两次换液还用pbs冲了，这样使细胞长得不好了吗？

wcfeng88

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每次换液最好都留下一些旧的培养基。消化的时候，倒出旧的培养基，先用少量胰酶润洗一下，倒出润洗液后，再加适量胰酶进去作用一分钟后倒出（仅留一点点），然后放37°培养箱中作用5~15min不等（看情况），作用完后把细胞拍下来，加入三分之二新鲜培养基和三分之一先前倒出的旧培养基即可。最好不要用PBS冲洗，你的细胞太脆弱了。

wcfeng88

回复 bty007 的帖子9 S* ~( {7 w  K, N) ~1 I

/ b( s+ A7 D/ }       前面的圆细胞应该是活的，但是由于细胞密度不够，细胞会长的很慢，以后要注意调整好细胞浓度，尤其是在原代培养的时候。可以试着加大血清浓度养几天看看情况。
! D+ m) X2 o, W& d. z3 P       虽然细胞量少，但是密度比较大了，可以消化下来传到小一点的培养皿里面，加大细胞密度会长得比较好。

bty007

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说的很详细，非常感谢~~

luoziwei

回复 bty007 的帖子( T* v: K3 P! B/ x! L0 _

5 _6 W8 e( |" X+ n0 G/ R. e下面的梭形，我觉得很有可能是成骨细胞

bty007

回复 luoziwei 的帖子8 w( g$ \6 E+ s" u) Y/ E# {$ U! K

$ t) |  x7 }( q, Q( I; p是最后一张图吗？这不是干细胞老化了？
: C. E8 Z3 D; K. ~这几张都是还没传过代的，原代十天左右吧，这么快干细胞有可能分化吗？谢谢