siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？

orchard

我最近想做大鼠骨髓间充质干细胞中的两个目的基因的沉默，同时还想做体内实验，但是分子生物学这块刚刚接触，有很多不懂的地方向大家请教。如果想选用RNA干扰的慢病毒载体做稳定转染，请问大家都有用过什么载体呢？

yaolei1984

我们一般公司做的慢病毒

sbsongguangqi

我建议用质粒~~~ 用病毒 表达量太大 毒性大~ 需要优化msc的培养条件~

燕北飞

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4 P" d$ e6 t3 u( a3 V" J' Y) [2 p
我们实验室以包病毒为特长，因此我们是自己做的。

orchard

回复 燕北飞 的帖子! c6 D. w& h2 K3 g4 W( S
* [' L9 }. g' c) V9 q% z
请问你们一般是自己构建还是找公司做呢？ 如果找公司的话哪家比较好？谢谢！

燕北飞

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8 E% A, J4 v: i# F  A' k# a! m# l% {8 u! q: b
关于质粒和病毒的分类和功能，我这里就不想多说了，病毒转染干细胞专区会提供给你很好的解释。

燕北飞

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6 F9 L7 X8 w( S" F
/ ~) G7 e, E) U) S1 h+ T如果质粒效果好的话，大家就不用包病毒了。

刘森泉

回复 燕北飞 的帖子/ L* v3 Y4 X- \' G4 Q) s
4 A* T. Y/ M5 i' j) W, i6 L
那可以用过表达的载体来构建siRNA的表达质粒？

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子% m3 ~: k* m* F% C, \+ {; O0 M9 g
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不一样，高表达的载体要选择好的质粒，对启动子的要求很高，如果想让过表达效果明显，需要包装腺病毒或者AAV。

刘森泉

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3 W) I# a- \. i. I8 I8 r3 D+ G
) q8 S2 t2 o, o! C: }5 h3 G辅助质粒共用是可以的，我意思是构建表达质粒的载体，对于高表达的和siRNA敲降的是否一样。谢谢！