siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？

orchard

我最近想做大鼠骨髓间充质干细胞中的两个目的基因的沉默，同时还想做体内实验，但是分子生物学这块刚刚接触，有很多不懂的地方向大家请教。如果想选用RNA干扰的慢病毒载体做稳定转染，请问大家都有用过什么载体呢？

yaolei1984

我们一般公司做的慢病毒

sbsongguangqi

我建议用质粒~~~ 用病毒 表达量太大 毒性大~ 需要优化msc的培养条件~

燕北飞

回复 orchard 的帖子6 ^* i$ Y& M0 o

1 C; I, y2 ]9 Z3 S6 M( @我们实验室以包病毒为特长，因此我们是自己做的。

orchard

回复 燕北飞 的帖子7 M9 n% N2 z9 T" H! K
( |: Z$ v  Q$ c4 N0 v
请问你们一般是自己构建还是找公司做呢？ 如果找公司的话哪家比较好？谢谢！

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子
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关于质粒和病毒的分类和功能，我这里就不想多说了，病毒转染干细胞专区会提供给你很好的解释。

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子/ @/ @0 m2 Y& s! @& C

4 D- O- }3 p( P& V如果质粒效果好的话，大家就不用包病毒了。

刘森泉

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那可以用过表达的载体来构建siRNA的表达质粒？

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子$ D( H6 Y& m+ K1 F! @, S
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不一样，高表达的载体要选择好的质粒，对启动子的要求很高，如果想让过表达效果明显，需要包装腺病毒或者AAV。

刘森泉

回复 zack 的帖子% X9 ~6 u& u+ Q# a: l

5 ~& B5 ^, b% |( l辅助质粒共用是可以的，我意思是构建表达质粒的载体，对于高表达的和siRNA敲降的是否一样。谢谢！