siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？

orchard

我最近想做大鼠骨髓间充质干细胞中的两个目的基因的沉默，同时还想做体内实验，但是分子生物学这块刚刚接触，有很多不懂的地方向大家请教。如果想选用RNA干扰的慢病毒载体做稳定转染，请问大家都有用过什么载体呢？

燕北飞

GV 慢病毒载体系列、pHelper 1.0 载体和 pHelper 2.0 载体三种常用质粒。

刘森泉

回复 燕北飞 的帖子8 N" A1 S! f* f9 `' I! u9 X

2 H$ O' |* e; Y+ S4 ?, g请教下，做过表达的慢病毒表达载体和siRNA敲降的的慢病毒载体是一样的么？如果不是，两者差什么？

zack

刘森泉 发表于 2012-6-7 08:49 / E! m4 D8 }* i' ~& D% u% k
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3 G  v$ L. a6 S- `) i
  A, I: P, m& Y% ?9 K" A2 ?, E9 P请教下，做过表达的慢病毒表达载体和siRNA敲降的的慢病毒载体是一样的么？如果不是，两 ...

1 m+ M( e$ C+ v4 ^* r2 B5 b5 T可以用同样的慢病毒辅助质粒去包装。

刘森泉

回复 zack 的帖子7 [( P4 i9 Z5 U, E8 S
4 x8 m$ I& \4 z( C" w' N
辅助质粒共用是可以的，我意思是构建表达质粒的载体，对于高表达的和siRNA敲降的是否一样。谢谢！

燕北飞

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- {& _6 h: m* }8 ]! u' G7 B/ b4 ]1 ?
不一样，高表达的载体要选择好的质粒，对启动子的要求很高，如果想让过表达效果明显，需要包装腺病毒或者AAV。

刘森泉

回复 燕北飞 的帖子7 k3 N: E9 r2 T* s

( K; ]+ Y/ F/ u  W6 y那可以用过表达的载体来构建siRNA的表达质粒？

燕北飞

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6 c' O9 V, w& r0 ]% M
( ^; L7 [2 y& q% h) p如果质粒效果好的话，大家就不用包病毒了。

燕北飞

回复 刘森泉 的帖子8 q  }* I' V3 v4 F/ E
3 f8 u1 ^& A6 i9 Y6 h
关于质粒和病毒的分类和功能，我这里就不想多说了，病毒转染干细胞专区会提供给你很好的解释。

orchard

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请问你们一般是自己构建还是找公司做呢？ 如果找公司的话哪家比较好？谢谢！