关于DC-CIK共培养

yanlu98

给位前辈，我想向大家请教一下一般DC在培养后第几天和CIK共培养，共培养时怎么收集DC，我看到以前的帖子，有前辈说用冷盐水冲，为什么要用冷盐水呢，那是多少度的盐水？而且用盐水冲过了之后要离心再把细胞收集起来移到CIK里面吗？希望各位前辈不吝赐教，越详细越好啊！

大少爷

DC细胞培养第六天/第七天，在显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养。2 J' K7 G3 F4 X# T4 ^. E/ b
5 O+ K( }: e# I. g) z! m
DC细胞收集：将贴壁细胞培养瓶中的培养液混匀后，转移至50 ml（或250 ml）无菌离心管，  G. I" b/ U( ]' b. e
立即向培养瓶加入10ml 4℃预冷的生理盐水，迅速晃动和吹打，立即移至离心管，重复上述步骤，
  N% b% h, t! ?- w8 I4 j3 K直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止。
* u( T" P4 S. o5 E  o% h- {将收集好的DC悬液离心（300g，12min，RT）弃上清，用移液管加生理盐水将细胞液稀释，7 C6 @! P9 q$ g- o7 B1 ]. h
混匀，离心，上清去掉，用培养基重悬细胞，加入悬浮培养细胞中与悬浮细胞共同培养。& t/ ~8 N# `. Q  H" p: w
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冷盐水刺激DC细胞收缩，便于从培养瓶上脱落，也容易吹打下来。不能用细胞刮刀或细胞消化液，对细胞损伤太大。

yanlu98

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非常感谢大少爷！！

yanlu98

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7 P9 Z5 k; D, U( ^! c2 E) w1 Y+ m" R5 ~2 o+ Z1 u
还想问一下大少爷 你说的“直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止”，那剩下的梭型细胞是什么呢？还想麻烦你能不能发几张你养的DC给我学习学习呢？

yanlu98

回复 大少爷 的帖子# W+ a, @0 t7 ~( L2 k9 t

' q% e* [( x3 A" L. Q/ h, M+ ?, i还想请教一下大少爷，用冰生理盐水冲就是为了让细胞收缩，那我直接用4度的1640冲，冲完了直接加进CIK里，就不离心了，可以吗？

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,/ t1 `0 C, U( }0 l% Z$ C; q! }
你真聪明

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,
8 @0 D( w' \; [6 x你真聪明