ips诱导和培养中的2个疑问

sizhengliu

各位大侠！小生有疑问，多多指导：& `: A4 F6 \  t; r- I
1，关于血清：在ips的诱导重编程阶段，克隆还未出来之前，这段时间可以使用胎牛血清吗？（gibco的澳洲血清）这对感染后细胞的增殖有无帮助？对克隆的出现和形成有无负作用？& [( H$ ]' e. J2 L
2，关于筛选：在细胞感染病毒后，需不需要进行药物筛选？在克隆形成后，需要怎样筛选合适的克隆进行扩增？
3 m7 Z% X! d* B

frankieisme

1.诱导重编程阶段中血清是必须的;! @1 D; r. Y) q% U) z
2.在细胞感染病毒后，需要G418和嘌呤霉素筛选各一次,在克隆形成后不需要筛选.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子: n6 R/ \% G7 u0 H

0 K7 P% E* K1 a# y6 q: i1.克隆未出现之前一直需要血清么？不是感染的时候（两到三天时间）含血清，之后换干细胞培养基么？
- q# R& N1 H( `2 o' }

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子
, I, F6 D/ ]! P1 Y% l; G" k  E$ G2 e$ x! y5 n: v
还有就是，血清的作用机理？

sizhengliu

回复 frankieisme 的帖子' ~' p, {7 c9 X3 N
( @7 ]- y5 \/ y& n
1,胎牛血清最晚可以用到什么时候换?
9 q8 U+ |/ z# W2，感染后，嘌呤霉素筛选可以终止的条件是什么？
0 z+ h# E5 @7 J" H, ?# ]. r谢谢！

frankieisme

回复 sizhengliu 的帖子  ?( P- v2 L4 g/ M' w! I$ X
0 v5 U5 r6 b+ n; F
不管是FP medium或者ES medium都含血清,只不过前者是10%,后者是15%;2 ~+ v+ P/ Q4 k  P3 w8 \: p
嘌呤酶素一般在G418筛选后第4天用,只用一次,之后就每天更换新鲜的ES medium,等到克隆长出来.

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子
& y6 W  m, i6 J9 Y  Z5 k1 G) d7 D
7 g: _3 V& l, e/ P5 ]0 y, o$ qES medium中也含有15%的血清啦.

zmm

回复 sizhengliu 的帖子
( T- Q% _6 [: j, ^9 z6 N& ?
: z$ _3 F3 o: G' G/ V您的细胞是什么物种的？细胞感染后我一般不筛选，而形成克隆后，用活细胞染色进行筛选！

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子
/ z1 c# v. w2 C7 P  R$ `/ Y- R
5 [' |% t) x' b* l0 }" a" z您是养小鼠的吧？

huangcong1988

回复 zmm 的帖子1 F. ?! x" k0 |$ u* P
( ^  s3 |* E/ x0 t
染色之后克隆还能用么？