hiPS传代时的消化问题

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今天传代用胶原酶消化30min后 feeder全晃下来了，iPS继续消化了20min也下不来
* t' `4 S( B: z: b9 i# g7 o. M酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml6 c7 Y) @' _4 w8 K4 s. s
怎么回事，大家遇到过吗

573639471

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% w2 U) i  K! h. D
1 {" ?' ?+ |' s$ W/ P9 P* {& b( m有图为证

开心果王

貌似feeder有些密啊，看到你的克隆消化后都散掉了，这样传代效率不高把！可以不用消化这么久，看到有些卷边就可以用枪头刮下来了！

wwy551

消化确实太久了，这样对ips克隆不好，我们都很少等克隆自己脱落的，一般消化5到10分钟就可以用1ml的移液管刮克隆了

fguw

酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml' ？
) t/ |( }2 U- W/ N- t. N3 A2 R我觉得你配的有问题，你用PBS，还是DMEM/F12 配的？
3 k, W+ e8 J  D+ E/ h+ R8 _不会是培养基吧？
* S' u. d! s) |. g1 W+ }" U应该用DMEM/F12

wang3033

feeder是用鼠尾胶原制备的，消化当然没有问题，IPS细胞团之间的连接不是靠胶原蛋白连接，所以细胞团散不开，其实你的胶原酶没有问题，而且消化已经过头了

白巧克力

你的feeder layer好密啊... ... 我买的不是sigma的，不知道大家用的是不是都是；而且我发现，用没用完的collagenaseIV（用剩冻起来再化开用）消化会比新的慢些。

490096812

我觉得可能是你的胰酶有问题，是不是有血清污染了啊

BNJN

我用的是Dispase，消化5min左右，再用枪吹下来。

zmm

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5 f/ |2 w& ?: n: Z' r* y
: d4 l. E# W1 b* U3 r; I3 @我觉得你的feeder太密了，这样会导致你hips状态不好。依我看你那克隆大小不用传代，可以在培养两三天。消化的时间基本在5min就可以了。还有你这个是人源的feeder吧？