骨髓间充质干细胞培养组织培养的细胞形态求解

王超

大家好，我最近培养的骨髓间充质干细胞来源与成年小鼠股骨的骨髓，细胞重悬培养一个多星期了，形状还是球行的，像是没有贴壁一样，体积也很小。有人说是实验小鼠年龄不对，我以前也没有做过，不知道是什么原因。现在准备再做一次，还请有经验的高手指点一二！谢谢！

zhangluan

是不是小鼠骨髓中干细胞含量太少了，我也没做过

细胞海洋

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2 r. p7 O; s) ], ]: x% Q建议上图 单个图片不要大于1000kb

feifei105

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' C5 I3 K% U! m' ?" I小鼠的BMSC与大鼠，兔子和人的相比很难养，主要就是纯度难提高，我以前分过别的来源的很好分，分出传代后诱导分化证明纯度很高，但用这一套方法来套小鼠的，就不管用。你看到的大多数悬浮的细胞都不是BMSC，而是血类，造血类细胞，不贴壁。以下几个建议，仅供参考：- r9 P% n( H( |5 y- c3 u
1 小鼠的年龄很重要。不要用中老年鼠，我分的时候用10天左右的。
- i3 |, {8 a* c0 V/ }6 q% m7 ]. z% i2 BMSC在骨髓中含量很少，约占骨髓内单核细胞总数的1/104——1/105，加之小鼠股骨和胫骨都非常小，所以给分离带来很大困难。可以一起多分几只老鼠，但要避免污染。( V" q& W) }" U
3 将细胞悬液铺到培养板后，随着培养换液，最初会有少量的细胞贴壁，随着时间的延长，会有单个克隆的出现，这步很重要。
! }/ E( d0 a3 p  k  a( ]. c$ p6 n4 挑取克隆到培养孔中，继续培养。. P  h2 |9 L$ c- V+ z9 b  X  l3 ?( P
5 BMSC有成克隆的能力，但形成的克隆不都是BMSC，所以需要分化鉴定等。5 @0 ^2 L& d/ _9 w$ P" L" ?
这样，就可以获得纯度很高的BMSC。还有一点，BMSC好消化，如果传代过程中消化不下来的细胞就不是BMSC，应弃之。

王超

回复 feifei105 的帖子. R+ q+ t1 K' Q$ o" |
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嗯，很感激你的指点。我看他们一般都用的大鼠，而且也提到年龄的问题。我也想那些球形的细胞是不是目的细胞，有你这么一说我就明白了。谢谢你！

huajie881026

小鼠的貌似可以将骨髓碾压碎，然后连碎骨一起培养，曾经看过一个Gibco公司的小鼠方面的视频，具体我不记得了，楼主可以找一下。

huajie881026

找到两篇nature protocol  ，建议看一下# S. {/ A' S3 t

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_然然

谢谢 下来看看

wangbiao915

小鼠的骨头小，建议一只老鼠的两根股骨和两根胫骨一起冲到一个培养瓶里   24小时之后不要PBS冲洗换液，再48H不要PBS冲洗换液