关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤
, q6 [7 W6 h% s) Q, T& h( A1 o, l2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？
, L/ I6 O6 x% e) E. k/ z% d3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗
0 i. r- a# w( w3 }0 p4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的8 J6 v, \% f, o0 d2 ^7 J; |
2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？2 Y9 F* e' E( q+ B9 k( D3 ^9 {$ h
3.不一定啊，放几天都没什么问题( E$ O) E6 J0 |, p
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大
* v4 o. {' v0 v/ r' ^; [2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。
) I1 }+ ?/ Y! _, d3.最好早点处理，不是当天也可以
; x9 M) R4 P. i" a3 L+ n4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。3 \  P2 u4 C2 j! @
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。
4 i: ~2 [/ v" }/ i! O+ I+ l% ~3.不是的，放置几天没事的。
; R4 f9 k; p' T4 p3 V/ C4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
( I0 D( Q/ Z9 v  ]5 r% r# m* p2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。7 w0 A, `" t) f$ s+ R
3.不是的，放置几天没事的。! |" ~: n( H7 ~
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。
6 W6 B0 z( r3 ^0 a3 s9 [2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。" F  r  V- v" g! K. z
3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。* s* a, T3 [& d2 W* ]
4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

回复 漂泊的风 的帖子: b' I5 z7 Y' E, ]0 |* o. x
3 c! x+ T; H( B0 w! k( F" Y8 h
有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

回复 上帝帮我转运吧 的帖子
' M3 b- ]1 i2 G# P- {/ z/ o7 A) |& _" v9 a
我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

回复 肖特 的帖子$ G4 ^, \/ Z* r3 j# h: K

1 @0 t7 m; v# ]% d( b  {是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊