关于人脐带间充质干细胞的几个问题

leostar131

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤
  x& M* g  v' L. q, d1 q4 G2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？7 D& p: B& \3 W
3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗- {# O# s: W  g; B1 ]9 `, F
4.为什么皿中细胞总是长不均匀

pailishi

1.消化过头肯定会损伤细胞的: w3 o1 u7 C2 w1 C& C
2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？
" H/ ~8 P  H. c( N' l5 B3.不一定啊，放几天都没什么问题: t8 }4 s, `) J4 M8 I2 u, E2 n
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

上帝帮我转运吧

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大+ P( d) ^! j* j, b
2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。
9 _$ A$ s1 W+ |7 f' ~% v3.最好早点处理，不是当天也可以. P: V' l' ?4 |# L! @( |
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
' \5 u5 W5 a3 N5 s; ~# j' Y: n2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。; L, G- N  D3 L. n: d  ~
3.不是的，放置几天没事的。
4 `% G: ^4 ^; [8 ~" Q6 p4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

漂泊的风

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。+ F, b! O1 i  S& I/ t4 C8 J9 K. t9 X- O) \
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。
) d& s$ ?! q  ?3.不是的，放置几天没事的。8 D5 ^+ W+ e7 c" S
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

肖特

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。, T! a! n- o6 W; T% M/ F) W6 h
2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。
$ X. c8 F5 t# p6 |0 B- ~, a5 y3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。# e5 t6 M! m6 D2 s. m: N
4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

王超

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

leostar131

回复 漂泊的风 的帖子$ E* T, E6 M5 C. O( R
. w6 W5 n' p" T/ j. o! ^
有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

leostar131

回复 上帝帮我转运吧 的帖子: t4 H, h+ J5 Y1 [4 ]

* _: @& B7 g. `% W我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

leostar131

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8 h) b2 F9 e+ t! @8 _  I8 o0 V
( Y) _  P9 s+ R+ ^是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊