现在开始准备养小鼠成纤维细胞，请前辈们赐教。

暗红色的风

我准备要开始诱导IPS细胞，现在第一步养小鼠成纤维细胞。我定一周大小BALB/C mice，组织块培养法：从师兄那里得到的Protocal  请大家分析补充。谢谢。在冷的PBS中将尾部皮肤剪成1mm3的小块，真皮朝下贴在干的100mm培养皿，放入培养箱15min等组织块上的PBS干后（防止漂浮），每个组织块滴100ul 左右的FBS培养过夜。第二天加入10%FBS的培养基，大约4-6天成纤维细胞长出组织块。消化传代，用3-5代的细胞感染。同时请问大家成纤维细胞的培养基：普通的DMEM，10%FBS. 双抗。请教成熟的培养方法。谢谢。

刘森泉

回复 暗红色的风 的帖子1 V+ \( |5 I$ K5 H( ~1 c

7 {' J# x: F8 M, c关键在于防止污染，细菌真心难对付，我已经做了好几次了，都以污染告终。

暗红色的风

回复 刘森泉 的帖子  l6 u; y2 @" l- j$ n
) ?2 k0 C: P+ W. g/ W& f( T0 E$ f
请问有成功的经验吗？
# A/ j: o( A; J' J& A. A7 P您的Protocal 是怎么样的，可以借鉴一下吗。谢谢

刘森泉

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1 \7 a! Q! c% }: ~6 ?" _  Z% _& c
6 a5 i* K* Q, ~+ Phttp://www.stemcell8.cn/thread-57892-1-1.html

yuhaoze

我还是喜欢用胎鼠做，污染率小一些

牙牙丫丫123

你可以试试这个~我们做还好~污染也是有的~不过只要洗的够干净就没问题~! h! E$ T( M+ _4 X$ N
一、成纤维细胞原代培养
" w+ X  p# I6 Y  k1．取材
! D1 |4 l3 k9 a: ~. s$ [) I5 Z取取剃毛后的组织（1cm2），置于盛放PBS（加双倍双抗）15ml或者50ml的离心管中，放置于冰上准备带回实验室取材用。+ Z) {( ^* T$ G- Q% a& r
2．材料处理       
3 o6 b* R: }8 A8 H: j: b7 ]（1）组织带回实验室后用加有双倍双抗的PBS冲洗后的置于3.5cm培养皿中，用手术刀去除皮毛和骨。: r: a" n' L) I
（2）在盛有DPBS的平皿中，用镊子将耳缘组织上残余的毛拔掉，反复清洗，直至DPBS中无任何杂质为止。$ S) p9 D' |. {/ B8 N- R4 y
（3）将组织放入一小皿中，尽量将其剪碎，呈糊状，加入少量培养液。) S& G0 ~) O, o5 ]
3．细胞培养
4 j2 T( |5 n; |- \（1）收集组织块转移至15ml离心管中，离心1000rpm，3min。
* Z( m. U$ @/ Y（2）弃去上清，以培养基重悬组织块，转移至T25培养瓶中，尽量将组织块均匀分布，同时小心吸去组织块周围的培养基。, n4 h: x% t: k, z
（3）倒置培养瓶37℃过夜培养，次日翻转，加入1.5ml培养基。
. B, f$ Q( l' W（4）隔日换液，约4日可见组织块周围有细胞爬出。

暗红色的风

回复 牙牙丫丫123 的帖子; \5 J# ?; I3 |8 I; p) @2 P5 d

/ n" X2 \8 Z7 K+ ]; o5 f" A非常感谢，准备明天试试，谢谢！

暗红色的风

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( _6 v) t9 T' c9 O8 F2 X* m
* E. l9 S. f1 N1 _请问PBS加多大双抗浓度？谢谢！

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子/ K: _7 z5 }7 \; n/ u# d5 m

" Z7 Q1 ]# p, h+ g谢谢，因为刚刚开始养细胞，胎鼠太贵了，所以先用成年的鼠培养成纤维细胞，等有了经验后面再养胎鼠细胞做Feeder。请问您做IPS细胞先是取的胎鼠成纤维细胞，后面养feeder也是胎鼠的吗？

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子  c( G3 z  x* q6 O* F% Q

% E7 {2 r+ g) M" R" ?谢谢，因为刚刚开始养细胞，胎鼠太贵了，所以先用成年的鼠培养成纤维细胞，等有了经验后面再养胎鼠细胞做Feeder。请问您做IPS细胞先是取的胎鼠成纤维细胞，后面养feeder也是胎鼠的吗？