荧光原位杂交（fish）探针设计原则和方法

l19rna

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7 W$ d) L2 v, Y' |* w, J
5 |8 n; [2 e6 @6 P8 Z第一次已经失败了啊，唉，呵呵

huangxf1998

在INVITRIGEN购买TA克隆的plasmid,照着说明书做。. T0 t) u& m/ V; d8 F
TA克隆的plasmid应该是最好用的，也最简单。0 K0 u" [# n. m& M5 T
几点注意：
" p# h! K: m9 n/ P/ a* R1.一次多选几个不同的片段，因为不是每个选取的片段都能成功，原因我也不知道，经验而已。3 `3 i: T5 P# T# J- c
2.注意RNA酶的污染，一定要保持无RNA酶操作。
% u! F( E! Z4 P5 x4 t/ v1 F' ^! l# `3.长度有时候不是最重要的，我做过1kb的，照样成功，但是成功率比较低。但是你的600bp应该没问题。
5 r* ]! w1 R- t& U, v8 i7 ?4.多探索，不要怕失败。第一次做就当练手，别太当回事。
3 q" ^  s8 I& M; ]" M, C/ u) {$ K- l

s1002297748

给力

细胞海洋

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! ^, b. l8 E  O
" f2 n3 X) z9 V% K/ n3 W+ u8 D参与讨论 获得积分

kkmmkkmmkk

weiyepan 发表于 2012-7-16 21:27
0 ~) q9 \7 Q7 ~" u' n. b如果楼主只是做体外培养的细胞的话，应该探针会好做一点，一般要求进细胞的片段长度是200~500bp，长度短了相 ...

; Q! m" a  }8 S4 P3 Z+ Q" V
附件下不了！包包不够啊！怎么样速度赚取包包啊？

l19rna

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) V* P! i) M, p! w+ h4 G
+ W& Q- h( r# i, [& G5 u# F) O: w果然是高手，嗯，谢谢啦。我要做cRNA探针呢，要做胚胎的Fish

weiyepan

- f' n, j( S/ [! e9 W
8 S6 C; a/ p* Q6 K. H' ~如果楼主只是做体外培养的细胞的话，应该探针会好做一点，一般要求进细胞的片段长度是200~500bp，长度短了相对特异性会差点。但是你做mRNA的话，看你想做RNA探针还是DNA探针，感觉RNA探针会好用很多，背景会低点。( T7 b3 M/ I4 u
用RNA探针的好处就是转录效率高，得率也高，掺入比例比DNA探针要高，可以用RNAse H降低背景。缺点是容易降解，如果是现做现用，应该没问题，如果要保存超过两星期，那就有点麻烦了。+ s5 V! ~$ h7 J0 s' F
上传一篇protocol，做RNA探针的，你把里面aa-UTP换成你要标的荧光UTP就行了。
) k/ R- y8 D* h0 x# ~8 t- a5 ^ standard protocol of T7 aa-RNA transcription.pdf (53.03 KB)

2012-7-16 21:30 上传

请用IE浏览器下载
下载积分: 威望 -2 , 包包 -5

l19rna

回复 妖妖空 的帖子) ]. N8 }# J8 B. G, [9 d* P: K( s" ^

% ?# Q% h4 l! K' e% \* Z9 W可以啊，最近脑子短路了~就用平常的引物设计软件就行

妖妖空

NCBI不行吗？