荧光原位杂交（fish）探针设计原则和方法

l19rna

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" |& \1 I2 B: n' w
& @" \1 q& F2 r% H% j9 Q8 ], C, z第一次已经失败了啊，唉，呵呵

huangxf1998

在INVITRIGEN购买TA克隆的plasmid,照着说明书做。
: D$ Q) j9 t, v( |  RTA克隆的plasmid应该是最好用的，也最简单。
. O9 Q$ i5 L$ s# `, r几点注意：" a/ b! ~6 ~+ r7 _$ w
1.一次多选几个不同的片段，因为不是每个选取的片段都能成功，原因我也不知道，经验而已。0 l) E3 m9 T: q8 C' @) o
2.注意RNA酶的污染，一定要保持无RNA酶操作。
3 v% r- ]& }6 n+ h3.长度有时候不是最重要的，我做过1kb的，照样成功，但是成功率比较低。但是你的600bp应该没问题。
9 Y9 P* {# l' n, T( j1 F: J; Z4.多探索，不要怕失败。第一次做就当练手，别太当回事。: V3 [' J9 w8 g: f+ D' m

s1002297748

给力

细胞海洋

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2 F% g/ L% ^7 s3 t( h参与讨论 获得积分

kkmmkkmmkk

weiyepan 发表于 2012-7-16 21:27 ( w8 [" D7 Q4 i9 h$ z
如果楼主只是做体外培养的细胞的话，应该探针会好做一点，一般要求进细胞的片段长度是200~500bp，长度短了相 ...

0 e3 }" g: _" d- I- y
附件下不了！包包不够啊！怎么样速度赚取包包啊？

l19rna

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$ g" Z( G9 i4 A6 Y( G" X
9 M2 V2 ]* W. N果然是高手，嗯，谢谢啦。我要做cRNA探针呢，要做胚胎的Fish

weiyepan

- \! h# a  D" T# x# o: Q6 t

9 _' \6 b7 G* j$ ~4 @" A+ t如果楼主只是做体外培养的细胞的话，应该探针会好做一点，一般要求进细胞的片段长度是200~500bp，长度短了相对特异性会差点。但是你做mRNA的话，看你想做RNA探针还是DNA探针，感觉RNA探针会好用很多，背景会低点。
+ R. B! c7 l! M用RNA探针的好处就是转录效率高，得率也高，掺入比例比DNA探针要高，可以用RNAse H降低背景。缺点是容易降解，如果是现做现用，应该没问题，如果要保存超过两星期，那就有点麻烦了。3 h. O( ~! o' u1 w' v
上传一篇protocol，做RNA探针的，你把里面aa-UTP换成你要标的荧光UTP就行了。( }; q7 e* Y0 [& V
standard protocol of T7 aa-RNA transcription.pdf (53.03 KB)

2012-7-16 21:30 上传

请用IE浏览器下载
下载积分: 威望 -2 , 包包 -5

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3 m$ Q) B0 d/ D* x9 I2 a可以啊，最近脑子短路了~就用平常的引物设计软件就行

妖妖空

NCBI不行吗？