分MEF

huangcong1988

前一阵子分了一下MEF，感觉分的状态还是不错，但是有一个问题就是，分MEF用的小鼠一定是要cf-1或者其它比较好一点的品种吗？我用昆明小鼠分MEF不行吗？还有就是小鼠孕龄一定要是13.5~14.5d吗？我之前分过一次，是13.5d，小鼠完全没长成型，根本没法分，所以这次分的是孕龄比较大一点的胎鼠，效果还不错，下面附图。想知道就是昆明小鼠分MEF行吗？还有就是胎鼠孕龄一定很严格吗？

huangcong1988

图片分别是：4x10（孕龄较大），4x10（孕龄较小），10x10

小春

你分MEF细胞是用于培养iPS或者ES细胞的feeder吗？' n2 D, \" N$ H& @& x9 F
1、昆明小鼠的feeder我们实验室也做过，感觉培养ES和iPS细胞是没问题的，但是昆明小鼠的遗传背景没有CF-1或者C57的明确，所以，最好还是用推荐的鼠种；
7 Q: R" X' y5 X- O2、我看wicell上面的protocol要求做feeder的MEF细胞最好在13.5天分离，去头、尾、四肢、内脏，只要躯干部位进行后续的消化。5 t5 ^3 f/ x9 V2 X
希望可以帮到你。

wawj

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6 S1 N7 E: ]1 p" d( v
我们用的就是昆明小鼠，效果不错。关于胎龄，13.5天应该是比较好的。做的胎龄稍大点的，刚开始看着挺好，养几代就老化了。

huangcong1988

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* @% Z. z  B2 @3 _% e+ C  S* @2 c. g! R% O& J& V8 r
胎龄稍大点的用传代次数较少的不行么？就是说胎龄大的MEF做饲养层行么？

wawj

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/ {3 V- i! }0 {4 a9 m1 ]5 r7 q
1 N# p- T& ~# K+ K+ F也行，那你就不要用第五代的了，第三代的就还行，四代可能就不咋好了。

huangcong1988

回复 wawj 的帖子3 i- s' t; E* r& p
5 N7 B: n+ j# J, O* j
en ,谢谢，上图状态还行吧？

刘森泉

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7 K. p. Y0 `, T5 T" ^
请问你是用什么方法分的MEF，看上去不错噢。

wawj

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: `  f1 P$ q, r5 \3 t
+ T! V7 b& r" ^还好  可能还得再养一代

huangcong1988

回复 刘森泉 的帖子; X- [! g# \. d
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我这个是用酶消化分的，当时我看的时候感觉还是不错，分出来不少，但是冻存复苏后还是死了很多，酶消化法我看有很多变异，就是同样是酶消化，但是很多人消化时间，胰酶浓度，还有分次消化等等，都不一样