分MEF

huangcong1988

前一阵子分了一下MEF，感觉分的状态还是不错，但是有一个问题就是，分MEF用的小鼠一定是要cf-1或者其它比较好一点的品种吗？我用昆明小鼠分MEF不行吗？还有就是小鼠孕龄一定要是13.5~14.5d吗？我之前分过一次，是13.5d，小鼠完全没长成型，根本没法分，所以这次分的是孕龄比较大一点的胎鼠，效果还不错，下面附图。想知道就是昆明小鼠分MEF行吗？还有就是胎鼠孕龄一定很严格吗？

huangcong1988

图片分别是：4x10（孕龄较大），4x10（孕龄较小），10x10

小春

你分MEF细胞是用于培养iPS或者ES细胞的feeder吗？
* B. L5 ~" l: C. _1、昆明小鼠的feeder我们实验室也做过，感觉培养ES和iPS细胞是没问题的，但是昆明小鼠的遗传背景没有CF-1或者C57的明确，所以，最好还是用推荐的鼠种；5 `2 Z$ v9 `* e) O6 Q9 i
2、我看wicell上面的protocol要求做feeder的MEF细胞最好在13.5天分离，去头、尾、四肢、内脏，只要躯干部位进行后续的消化。2 F2 |, G8 s! Y* m
希望可以帮到你。

wawj

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我们用的就是昆明小鼠，效果不错。关于胎龄，13.5天应该是比较好的。做的胎龄稍大点的，刚开始看着挺好，养几代就老化了。

huangcong1988

回复 wawj 的帖子$ l! _4 E0 v- S$ ^& N

" }. \( k! S2 u5 S- K胎龄稍大点的用传代次数较少的不行么？就是说胎龄大的MEF做饲养层行么？

wawj

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" n0 y- S5 J; ^# r) D1 ]" i# h: v: r4 p
也行，那你就不要用第五代的了，第三代的就还行，四代可能就不咋好了。

huangcong1988

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' p% G- W9 C+ q' V' J( C2 ?
/ n  w4 @4 B( q6 g& Jen ,谢谢，上图状态还行吧？

刘森泉

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. I8 `# Y- T7 D3 r7 i' {! s6 {) G# Z; b7 q/ a0 k
请问你是用什么方法分的MEF，看上去不错噢。

wawj

回复 huangcong1988 的帖子3 m# E- z: v' D9 c3 I

5 r% N# t( c; `1 }: d0 \还好  可能还得再养一代

huangcong1988

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) S. [1 ^. C+ a  ?! c% p. O
  ?, U. y* p* p' v8 ^- x我这个是用酶消化分的，当时我看的时候感觉还是不错，分出来不少，但是冻存复苏后还是死了很多，酶消化法我看有很多变异，就是同样是酶消化，但是很多人消化时间，胰酶浓度，还有分次消化等等，都不一样