菜鸟的烦恼

余冬冬

        小弟是刚做的精原干细胞相关课题，因为过去不是弄这个的，所以很多都不懂，菜鸟一个。希望各位大侠能给些指导和建议。, O2 q1 j" I9 W& s, n1 Q
        我按照机械分离和酶消化法分离提取到的小鼠精原细胞，再每隔近40min差异贴壁，一般差个3、4次，但是从那之后，基本上细胞就没啥动静，也不知道该不该换液。各位都是几天换一次液，换液时需要离心吗？原代细胞要不要加抗生素，一般多长时间会出现克隆呢？我用的是普通的DMEM,一般是10%的血清，没有加细胞因子，但是感觉细胞基本不长。
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pailishi

应该加生长因子的

素心无痕

如果不添加生长因子，细胞如何进行定向生长？你的DMEM是不是仅仅用于对照会好一些

chenchunlei

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4 ~, u" O0 Q6 ~8 d* g& f5 i
楼主几天的小鼠消化的？

余冬冬

6-7dpp

余冬冬

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3 Q# |+ Z8 N# ^* R% \6 [
我也想加，可是老板让我先不加试试，看能否出现克隆团，而且，我也不需要定向分化，只要能将干细胞富集，形成克隆团，接着就转染病毒了。关键是，养了那么多天，也没啥动静。

余冬冬

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0 l  t. z- f& C  K: A2 _' ^0 G. i出生后6-7天的小鼠，昆白系。

chenchunlei

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楼主贴壁后+ ?* Y( a3 F5 U$ M0 u8 ^- L
阳性率能达多少？
7 c6 x" R0 S: L3 P& B7 F

余冬冬

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' o3 q8 h# A/ B6 I' @- l" i5 \请教一下，你说的阳性率是指？

hcluo

8 k) U5 H, p: z/ d$ A: b. z+ l
5 |% k! \9 P% B
建议采用Brinster提供的经典的分选方法，就是利用SSCs的特异性表达标志物Thy1做MACS分选，这样可以提高细胞分选的纯度，而且饲养起来相对要容易，这样可以尽可能的排除Sertoli 等细胞的对SSCs生长的干扰。另外，细胞培养的时候还是建议使用饲养层以及加入一些生长因子，比如LIF，GDNF等。祝好运。